【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及植物组织培养，更具体的说是一种受污染的兰花组培苗的挽救方法及应用。
技术介绍
1、兰科植物极具观赏经济价值，深受国内外市场青睐，特别是蝴蝶兰、文心兰等热带兰花，在花卉市场上占据重要的位置。在国内，蝴蝶兰的新品种创新及市场体系已日趋成熟，文心兰也开始起步，未来发展空间广阔。
2、蝴蝶兰、文心兰等兰花杂交存在不亲和性，杂交成功率低，子代生长周期长，因而兰花新品种选育与繁育的时间成本、人工成本及材料成本高，保障杂交后代、繁殖材料等高价值材料的成活尤为重要。但实际生产过程中，蝴蝶兰、文心兰等兰花的杂交后代、繁殖材料等高价值的材料在组培繁殖、运输等过程中，或因其他事故造成组培的兰花材料污染，极大影响了兰花新品种选育与繁育的进程，并造成了巨大的经济损失。因此，如何对兰花已污染的组培苗的幼苗组织材料进行挽救，以获得无菌材料，是兰花品种繁育的关键。
3、现有技术，针对受污染的兰花材料多使用剧毒的升汞作为消毒剂，对实验人员及环境存在较大的安全隐患，增加环保成本。另外也存在安全隐患小的挽救方法，如申请号202110992431.0，专利技术名称为：兰科植物组培材料无菌处理方法，使用了70％的酒精和3％的次氯酸钠溶液(有效氯含量)，处理的材料的部位为花梗，而相比花梗组织，更为幼嫩的组培幼苗耐受性比较弱，加上幼苗组织小，经长时间较高浓度的次氯酸钠时间处理后，死亡率高，即便处理后组织未死亡，在后期培养过程中也存在二次污染导致的得率低的问题。
4、因此，如何更加安全高效的对兰花已污染的组培苗的幼苗组织材料进
技术实现思路
1、有鉴于此，本专利技术提供了一种受污染的兰花组培苗的挽救方法及应用，采用洗涤剂、75％酒精、含84消毒液的混合溶液以及抗性培养基对污染的兰花组培苗上的组织进行挽救，该方法不仅适用于真菌性污染，同样适用于细菌性污染，环境友好型的试剂-84消毒液，极大消除了科研人员和环境的安全隐患；筛选了适合且有效的抗性培养基，提高挽救污染植株的成功率以及获取率；对于污染严重的材料，可获得10％-30％的无菌单株材料，对于污染较轻的材料，可获得60％以上的无菌单株。
2、为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
3、一种受污染的兰花组培苗的挽救方法，包括如下步骤：
4、(1)取受污染的兰花组培苗，清水冲洗后晾干，剥离外部的叶片，切除根部和叶片上部，保留1-2cm兰花组织，备用；
5、(2)加入洗涤剂，对步骤(1)1-2cm兰花组织冲洗10-30min，吸干水分；
6、(3)吸干水分后将兰花组织，用75％的酒精处理30-60s；
7、(4)酒精处理后，置于84消毒液和无菌水组成的混合溶液中处理10-20min；
8、(5)经混合溶液处理后，用75％的酒精处理30-60s，无菌水冲洗，吸干水分；
9、(6)将兰花组织转移到抗性培养基中，置于无菌培养室中培养7-15d；
10、(7)抗性处理后，置于壮根生根培养基中培养成苗，即得无污染的兰花材料。
11、上述步骤(2)的有益效果为：清除微生物及其分泌物；
12、上述步骤(3)的有益效果为：对组织表层微生物进行消杀；
13、上述步骤(4)的有益效果为：对组织表面的微生物进行更进一步的消杀
14、上述步骤(5)的有益效果为：用75％的酒精处理30-60s，以更好的渗入外侧组织的皮下，进一步杀死可能扎入组织的微生物或菌丝；
15、本专利技术采用了84消毒液与无菌水1:1的体积比配置的混合液消毒，有效氯含量低，仅为2％-2.5％，操作简单，结合前后两次75％酒精消毒，并重点配合使用抗性培养基进行培养，在获得较好杀菌效果的同时，极大降低了幼苗的死亡。
16、优选的，步骤(1)所述清水冲洗的时间为5-10min。
17、优选的，步骤(3)-(5)均在无菌操作下进行。
18、优选的，步骤(4)所述混合溶液中84消毒液和无菌水按照1:1的体积比配制。
19、优选的，步骤(5)所述无菌水冲洗的次数为2-3次。
20、优选的，步骤(6)所述抗性培养基配方如下：1/2ms+20-30g·l-1蔗糖+0.03g·l-1ac+200-400mg·l-1头孢+200-800mg·l-1特美汀+
21、0.01％-0.05％高锰酸钾，ph 5.6-6.5。
22、优选的，步骤(6)所述无菌培养室培养的温度为20-25℃，湿度50-60％光照强度800-1000lux，光周期8-16h·d-1。
23、优选的，步骤(7)所述壮根生根培养基配方如下：1/2ms+20-30g·l-1蔗糖+100ml·l-1椰汁+0.3g·l-1ac，ph 5.6-6.5。
24、本专利技术的再一目的在于提供：上述挽救方法在兰花组培苗挽救中的应用。
25、经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：
26、本专利技术挽救方法，适用于真菌性污染和细菌性污染，采用了环境友好型的试剂-84消毒液，极大消除了科研人员和环境的安全隐患；筛选了适合且有效的抗性培养基，提高挽救污染植株的成功率以及获取率；对于污染严重的材料-真菌扩散到整个培养容器，可获得10％-30％的无菌单株材料，对于污染较轻的材料，可获得60％以上的无菌单株。
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1.一种受污染的兰花组培苗的挽救方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的受污染的兰花组培苗的挽救方法，其特征在于，步骤(1)所述清水冲洗的时间为5-10min。
3.根据权利要求1所述的受污染的兰花组培苗的挽救方法，其特征在于，步骤(3)-(5)均在无菌操作下进行。
4.根据权利要求1所述的受污染的兰花组培苗的挽救方法，其特征在于，步骤(4)所述混合溶液中84消毒液和无菌水按照1:1的体积比配制。
5.根据权利要求1所述的受污染的兰花组培苗的挽救方法，其特征在于，步骤(5)所述无菌水冲洗的次数为2-3次。
6.根据权利要求1所述的受污染的兰花组培苗的挽救方法，其特征在于，步骤(6)所述抗性培养基配方如下：1/2MS+20-30g·L-1蔗糖+0.03g·L-1AC+200～400mg·L-1头孢+200～800mg·L-1特美汀+0.01％-0.05％高锰酸钾，pH 5.6-6.5。
7.根据权利要求1所述的受污染的兰花组培苗的挽救方法，其特征在于，步骤(6)所述无菌培养室培养的温度为20-
8.根据权利要求1所述的受污染的兰花组培苗的挽救方法，其特征在于，步骤(7)所述壮根生根培养基配方如下：1/2MS+20-30g·L-1蔗糖+100ml·L-1椰汁+0.3g·L-1AC，pH 5.6-6.5。
9.权利要求1-8任一所述的挽救方法在兰花组培苗挽救中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种受污染的兰花组培苗的挽救方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的受污染的兰花组培苗的挽救方法，其特征在于，步骤(1)所述清水冲洗的时间为5-10min。
3.根据权利要求1所述的受污染的兰花组培苗的挽救方法，其特征在于，步骤(3)-(5)均在无菌操作下进行。
4.根据权利要求1所述的受污染的兰花组培苗的挽救方法，其特征在于，步骤(4)所述混合溶液中84消毒液和无菌水按照1:1的体积比配制。
5.根据权利要求1所述的受污染的兰花组培苗的挽救方法，其特征在于，步骤(5)所述无菌水冲洗的次数为2-3次。
6.根据权利要求1所述的受污染的兰花组培苗的挽救方法，其特征在于，步骤(6)所述抗性培养基配方如下：...
【专利技术属性】
技术研发人员：方能炎，罗远华，叶秀仙，钟淮钦，樊荣辉，陈燕，林兵，
申请(专利权)人：福建省农业科学院作物研究所福建省种质资源中心，
类型：发明
国别省市：
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