环氧化物水解酶突变体、制备方法及其应用技术

本申请公开了一种环氧化物水解酶突变体、制备方法及其应用，环氧化物水解酶为EHs‑2，环氧化物水解酶突变体突变位点如下:将EHs‑2的第38位H突变为I，将EHs‑2的第41位H突变为R，将EHs‑2的第71位H突变为V，将EHs‑2的第117位K突变为L，将EHs‑2的第187位L突变为F，将EHs‑2的第244位S突变为A，相比于EHs‑2，本发明专利技术对于外消旋环氧苯乙烷的催化活力提升1.8‑10.3倍，合成的(R)‑环氧苯乙烷和(R)‑1‑苯基‑1,2‑乙二醇的ee值分别在99％和98％以上，本发明专利技术在高效催化外消旋环氧苯乙烷制备(R)‑环氧苯乙烷和(R)‑1‑苯基‑1,2‑乙二醇的应用中展现了良好的工业化潜力和商业价值。

【技术实现步骤摘要】

本申请涉及生物工程领域，具体为一种环氧化物水解酶突变体、制备方法及其应用。

技术介绍

1、环氧苯乙烷(结构式ⅰ)，又名氧化苯乙烯，透明无色至浅黄色液体，分子量为120.1，其广泛应用于合成盐酸左旋咪唑、β-苯乙醇、紫外吸收剂和环氧树脂稀释剂等化合物。

2、(r)-1-苯基-1,2-乙二醇(结构式ⅱ)是制备具有光学活性的医药、农药以及功能性材料的重要手性砌块，其可由环氧苯乙烷开环生成。目前，环氧苯乙烷和1-苯基-1,2-乙二醇合成方法众多，但这些方法普遍存在底物浓度低、酶催化效果差、产品光学纯度低等问题。因此，开发环氧苯乙烷和1-苯基-1,2-乙二醇的绿色、高效、高光学纯合成工艺具有重要意义。

3、目前已经有少数研究报道了使用酶制剂进行手性环氧苯乙烷和1-苯基-1,2-乙二醇的制备，如江南大学朱利娟等人发表的“多酶偶联催化制备手性化合物(s)-环氧苯乙烷”一文报道了(s)-环氧苯乙烷的制备方法，其利用羰基还原酶sys1、葡萄糖1-脱氢酶sygdh和卤代醇脱卤酶syhhec耦联催化α-溴代苯乙酮以高效制备(s)-环氧苯乙烷，即通过羰基还本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种环氧化物水解酶突变体，其特征在于，环氧化物水解酶为EHs-2，EHs-2的核苷酸序如SEQ ID NO.1所示，氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，环氧化物水解酶突变体的名称、突变位点和氨基酸序列如下:

2.根据权利要求1所述的环氧化物水解酶突变体，其特征在于，环氧化物水解酶突变体的突变位包括，将EHs-2的第38位H突变为I、将EHs-2的第41位H突变为R、将EHs-2的第71位H突变为V、将EHs-2的第117位K突变为L、将EHs-2的第187位L突变为F或将EHs-2的第244位S突变为A的至少一个。

3.一种环氧化物水解酶突变体的制备方法，...

【技术特征摘要】

1.一种环氧化物水解酶突变体，其特征在于，环氧化物水解酶为ehs-2，ehs-2的核苷酸序如seq id no.1所示，氨基酸序列如seq id no.2所示，环氧化物水解酶突变体的名称、突变位点和氨基酸序列如下:

2.根据权利要求1所述的环氧化物水解酶突变体，其特征在于，环氧化物水解酶突变体的突变位包括，将ehs-2的第38位h突变为i、将ehs-2的第41位h突变为r、将ehs-2的第71位h突变为v、将ehs-2的第117位k突变为l、将ehs-2的第187位l突变为f或将ehs-2的第244位s突变为a的至少一个。

3.一种环氧化物水解酶突变体的制备方法，用于制备如权利要求1所述的环氧化物水解酶突变体，其特征在于，包括：

4.根据权利要求3所述的环氧化物水解酶突变体的制备方法，其特征在于，步骤二中，以携带有ehs-2基因的重组质粒为模板，进行重叠延伸pcr，将ehs-2中第38位h突变为l、第41位h突变为r、第71位t突变为v的突变产物、第117位k突变为l、第187位l突变为f或第244位s突变为a中至少两个位点进行突变，得到将ehs-2至少两个位点突变的环氧化物水解酶突变体。

5.一种环氧化物水解酶突变体的编码基因，用于编码如权利要求1或2所述的环氧化物水解酶突变体，其特征在于，编码基因的核苷酸序列如seq id no.3、seq id no.5、seq idno.7、seq id no.9、seq id no.11、seq id no.13、seq id no.15、seq id no.17、seq idno.19、seq...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴彦，罗志波，李宁，卢夏锋，余达勇，章雪琦，
申请(专利权)人：杭州微远生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：