一种羰基还原酶突变体及酶催化合成S型玻色因的方法技术

本发明专利技术属于酶工程和生物医药技术领域，具体涉及一种羰基还原酶突变体，并进一步公开其酶催化合成S型玻色因的方法及应用。本发明专利技术方案通过进一步对野生型羰基还原酶进行建库筛选，得到一系列优良的羰基还原酶突变株并首次筛选获得一种羰基还原酶，该酶能够催化底物β‑丙酮木糖苷合成S构型玻色因产物，其最优突变体在4‑6小时内，可在高浓度底物情况下(200g/L‑230g/L)，使其转化率达到99.94％，尤其是S/R异构体比例达到99.092/0.857，非常适于工业规模化生产。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于酶工程和生物医药，具体涉及一种羰基还原酶突变体，并进一步公开其酶催化合成s型玻色因的方法及应用。

技术介绍

1、玻色因(pro-xylane)是一种具有抗衰老活性物的木糖衍生物，可以促进胶原蛋白的合成，使肌肤更强韧有弹性，有助于预防及改善衰老。目前，工业合成玻色因的方法主要是通过化学法合成，首先，以木糖和乙酰丙酮为底物，加入碳酸氢钠或氢氧化钠调节ph碱性条件，于70℃-90℃进行搅拌孵育，期间利用薄层层析监控反应过程直至反应结束，经过分离纯化得到玻色因中间体β-丙酮木糖苷；其次，在乙醇、甲醇或异丙醇溶液中加入底物β-丙酮木糖苷与还原剂进行反应，同样利用薄层层析监控反应过程直至反应结束，进行除盐、结晶、干燥等一系列纯化步骤获得s-玻色因或s/r玻色因。目前，化学法合成过程中所用到的还原剂多为硼氢化钠、乙酰基硼氢化钠、锂铝氢化物等重金属还原剂，但由于玻色因结构的特殊性，很难通过简单的方法将还原剂中的硼离子完全去除，必定造成了后期复杂的分离纯化工艺，使其生产成本的大幅提升。因此，利用生物酶作为催化剂催化合成s-型玻色因，具有催化条件温和高效、分离纯本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种羰基还原酶突变体，其特征在于，所述突变体基于羰基还原酶基因CdKRED为基础，并包括如下突变位点中的至少一个：Y92G、K139N、P164I、V199R、S217Q；

2.根据权利要求1所述的羰基还原酶突变体，其特征在于，所述突变体包括：

3.一种编码权利要求1或2所述羰基还原酶突变体的基因。

4.一种包含如权利要求3所述基因的重组质粒；

5.一种包含如权利要求3所述基因或权利要求4所述重组质粒的基因工程菌；

6.一种由权利要求5所述基因工程菌编码的羰基还原酶和/或葡萄糖脱氢酶。

7.一种酶催化合成S型玻色...

【技术特征摘要】

1.一种羰基还原酶突变体，其特征在于，所述突变体基于羰基还原酶基因cdkred为基础，并包括如下突变位点中的至少一个：y92g、k139n、p164i、v199r、s217q；

2.根据权利要求1所述的羰基还原酶突变体，其特征在于，所述突变体包括：

3.一种编码权利要求1或2所述羰基还原酶突变体的基因。

4.一种包含如权利要求3所述基因的重组质粒；

5.一种包含如权利要求3所述基因或权利要求4所述重组质粒的基因工程菌；

6.一种由权利要求5所述基因工程菌编码的羰基还原酶和/或葡...

【专利技术属性】
技术研发人员：何定兵，黄斌，
申请(专利权)人：无锡冰河生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：