一管法酶促合成加帽mRNA的方法技术

本发明专利技术提供了一管法酶促合成加帽mRNA的方法。本发明专利技术的方法省略了IVT后的纯化mRNA的步骤，并获得了加帽效率更高、副产物更少的加帽产物。本发明专利技术提供了工艺简便、流程较短、快速高效的酶促合成加帽mRNA的方法，简化了mRNA加帽产物的生产工艺、降低了生产成本，有利于工业化的生产。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物，具体涉及到一管法酶促合成加帽mrna的方法。

技术介绍

1、在无帽的ssrna中添加一个帽子结构对于许多真核细胞极为重要。它可以提高rna翻译的蛋白质的表达效率。此外，含有5'-三磷酸的无帽rna可以激活先天免疫反应。因此，随着mrna疫苗和药物广泛应用于疾病预防和治疗，向合成rna添加一个帽结构是非常有利的。

2、目前，主要有两种加帽mrna合成方法。第一种方法为共转录加帽法，通过共转录将帽子结构类似物加入到体外转录反应中，帽在体外转录过程中被共转录合并到rna分子中。然而，该方法底物昂贵，效率不高，产率较低，产生的转录产物的免疫原性较高，对后续转录产物mrna的应用造成困难。

3、另一种方法为酶促rna加帽法，通过牛痘病毒加帽酶和二氧甲基转移酶进行酶法加帽，形成具有甲基鸟苷帽子的mrna。与第一种共转录方法相比，酶促rna加帽法可以实现帽状mrna量产。通常体外转录合成(ivt)获得大量的mrna，纯化后进行酶法加帽。纯化过程中可能存在rna降解风险。因此，酶促rna加帽法的操作复杂，耗时较长，工艺繁琐，中间本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种体外合成加帽mRNA的方法，其特征在于，包括步骤：

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，(S2)和(S3)在同一反应容器中进行。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，(S3)中，所述第二反应体系中，目标mRNA分子的浓度为0.20μg/μl-2.0μg/μl，较佳地为0.25μg/μl-1.5μg/μl；更佳地为0.5μg/μl-1.25μg/μl。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述第二反应体系还包含：螯合剂；较佳地，所述螯合剂选自下组：EDTA(乙二胺四乙酸)、NTA(氨基三乙酸)、DTPA(二亚乙基三胺五乙酸)、CDTA...

【技术特征摘要】

1.一种体外合成加帽mrna的方法，其特征在于，包括步骤：

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，(s2)和(s3)在同一反应容器中进行。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，(s3)中，所述第二反应体系中，目标mrna分子的浓度为0.20μg/μl-2.0μg/μl，较佳地为0.25μg/μl-1.5μg/μl；更佳地为0.5μg/μl-1.25μg/μl。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述第二反应体系还包含：螯合剂；较佳地，所述螯合剂选自下组：edta(乙二胺四乙酸)、nta(氨基三乙酸)、dtpa(二亚乙基三胺五乙酸)、cdta(1.2-环己二胺四乙酸)、eddha(乙二胺二邻苯基乙酸)和heedta(氨乙基乙醇胺三乙酸)以及酒石酸钠、柠檬酸钠、葡萄糖酸钠、或其组合。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，(s3)中，所述病毒加帽酶选自下组：牛痘病毒加帽酶、非洲猪瘟病毒加帽酶、蓝舌病毒加帽酶、竹花叶病毒加帽...

【专利技术属性】
技术研发人员：李亚丽，朱化星，位小丫，张清仪，
申请(专利权)人：苏州近岸蛋白质科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：