【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及动物模型及其应用，更具体地说，它涉及基于uox基因敲除小鼠肾结石动物模型的构建方法。
技术介绍
1、高尿酸血症(hyperuricemia,hua)主要是由于尿酸排泄减少或嘌呤代谢障碍而引起的血尿酸增高。hua发病率逐年增高，肾结石患者中26-40％的患者合并高尿酸血症。hua是导致肾结石的高风险因素，随着人类的饮食结构和生活习惯等方式的改变，肾结石的发生率会进一步上升，将严重危害人类的身体健康。因此积极有效的控制血尿酸水平能够扭转肾结石形成的诱因，降低复发率，具有积极意义。
2、人类在进化中编码尿酸氧化酶(urate oxidase，uox)的基因沉默失活(因此患高尿酸血症的风险也大大增加)，而啮齿类动物编码尿酸氧化酶的基因正常表达，uox可将尿酸分解为尿囊素从而排除体外。这一特征使得在啮齿类动物中复制人类高尿酸血症具有较大的困难。因此利用基因工程技术使动物产生尿酸酶的基因缺失，获得uox缺乏的小鼠，造成高尿酸血症模型。该模型能更好的模拟人类中尿酸的生成及代谢途径，并为研究某药物或某靶点对高尿酸血症或高尿酸血症肾结石模型的作用机制提供良好并稳定的模型。
技术实现思路
1、为了克服现有技术中所存在的上述缺陷，本专利技术提供了基于uox基因敲除小鼠肾结石动物模型的构建方法，该模型能更好的模拟人类中尿酸的生成及代谢途径，并为研究某药物或某靶点对高尿酸血症或高尿酸血症肾结石模型的作用机制提供良好并稳定的模型。
2、本专利技术的上述技术目的是通过以下技
3、s1、小鼠的选择：选取健康、精神状况良好、未发生外伤及残疾的uox-/-的雄性c57bl/6小鼠为实验动物，进行适应性饲养；
4、s2、小鼠的鉴定：饲养1周后，收集小鼠的血液样本0.2ml，并对小鼠的血清尿酸进行检测；
5、s3、小鼠的饲养：进行两周的恢复性饲养，期间给予小鼠标准饲料、适量的瓜子及洁净饮用水，每天更换饮水、垫料和饲料并观察小鼠生命健康情况；
6、s4、小鼠的造模：给予小鼠标准饲料、配比好的nh4ci(0.25％)浓度自由饮用水和剂量为5mg·kg-1的苯溴马隆灌胃处理3周，每天更换饮水、垫料和饲料并观察小鼠生命健康情况。
7、s5、模型的鉴定，具体包括：
8、1)小鼠完成给药三周处理后，使用小鼠的超声成像仪对小鼠的小鼠的泌尿系进行腹部检查，观察小鼠肾脏，若存在结石或尿盐沉积，则模型鉴定成功；
9、2)若步骤(1)中观察小鼠肾脏中不存在结石或尿盐沉积时，收集小鼠的尿液进行尿液晶体检测，并将小鼠尿液在离心机上离心后，在显微镜镜下观察晶体的数量及形态，最后在偏正光镜下观察晶体；
10、3)然后对小鼠进行解剖取材，通过肉眼观察或把小鼠的肾脏组织进行he染色，观察肾脏组织切片，若有晶体或结石形成，则模型鉴定成功。
11、进一步的，步骤s2中，采用小鼠眼眶静脉丛采血的方式收集小鼠的血液样本。
12、进一步的，步骤s2中，使用尿酸含量检测试剂盒对小鼠的血清尿酸进行检测。
13、基于uox基因敲除小鼠肾结石动物模型在抗高尿酸血症治疗中的应用。
14、基于uox基因敲除小鼠肾结石动物模型在肾结石治疗中的应用。
15、综上所述，本专利技术具有以下有益效果：
16、(1)目前尚未有高尿酸血症肾结石的动物模型的创建。
17、(2)现有的各种肾结石的动物模型，绝大部分是关于草酸钙肾结石模型的构建方法，而本专利构建的是高尿酸血症肾结石动物模型，并且，本方法构建出的结石模型并非单一的模型，还能构建出草酸钙结石模型、纯尿酸结石模型或者混合型结石模型。这与临床上高尿酸血症肾结石患者术后结石成分分析结果是一致的。
18、(3)本申请通过uox基因敲除小鼠来构建，不需要使用其他诱导小鼠高尿酸血症药物或事物，大大减轻了小鼠负担，也大大减少了构建模型的老鼠死亡率；同时，基因敲除的小鼠能使得小鼠能维持高水平的高尿酸血症，而因药物或事物构建的模型，因为代谢等因素，并不能构建出稳定的高尿酸血症模型。
19、(4)基因敲除后的小鼠，恰恰更能贴近模拟出人体内的尿酸代谢途径，为临床上药物治疗及病理机制的探讨提供更加稳定的模型。
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1.基于UOX基因敲除小鼠肾结石动物模型的构建方法，其特征是：包括以下步骤：
2.基于权利要求1所述的基于UOX基因敲除小鼠肾结石动物模型的构建方法，其特征在于，步骤S2中，采用小鼠眼眶静脉丛采血的方式收集小鼠的血液样本。
3.基于权利要求1所述的基于UOX基因敲除小鼠肾结石动物模型的构建方法，其特征在于，步骤S2中，使用尿酸含量检测试剂盒对小鼠的血清尿酸进行检测。
4.基于权利要求1所述的基于UOX基因敲除小鼠肾结石动物模型在抗高尿酸血症治疗中的应用。
5.基于权利要求1所述的基于UOX基因敲除小鼠肾结石动物模型在肾结石治疗中的应用。
【技术特征摘要】
1.基于uox基因敲除小鼠肾结石动物模型的构建方法，其特征是：包括以下步骤：
2.基于权利要求1所述的基于uox基因敲除小鼠肾结石动物模型的构建方法，其特征在于，步骤s2中，采用小鼠眼眶静脉丛采血的方式收集小鼠的血液样本。
3.基于权利要求1所述的基于uox基因敲除小鼠肾...
【专利技术属性】
技术研发人员：钟禹文，陈家浩，粟宏伟，赖俊谕，
申请(专利权)人：西南医科大学附属中医医院，
类型：发明
国别省市：
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