一种猪腹泻四项病毒核酸快速POCT检测试剂盒制造技术

本申请涉及生物技术领域，公开了一种猪腹泻四项病毒核酸快速POCT检测试剂盒。公开了用于检测PEDV、TGEV、PDCoV和PoRV的试剂在制备诊断猪群病毒性腹泻病的试剂盒中的应用，所述试剂包括以下引物对：用于检测PEDV的引物对，其序列如SEQ ID NO:1～2所示；用于检测TGEV的引物对，其序列如SEQ ID NO:4～5所示；用于检测PDCoV的引物对，其序列如SEQ ID NO:7～8所示；用于检测PoRV的引物对，其序列如SEQ ID NO:10～11所示；还公开一种包括上述试剂的猪腹泻四项病毒核酸快速POCT检测试剂盒。本申请的试剂盒针对4种病毒及猪内源性基因的保守区设计特异性引物，通过优化多重PCR反应条件，建立了一种可同时检测并区别以上4种病毒及内参的RT‑PCR方法。

【技术实现步骤摘要】

本申请涉及生物，更具体地说，它涉及一种猪腹泻四项病毒核酸快速poct检测试剂盒。

技术介绍

1、猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus，pedv)、猪传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis virus，tgev)、猪δ冠状病毒(porcinedeltacoronavirus，pdcov)和猪轮状病毒(porcine rotavirus，porv)被认为是导致猪群发生腹泻的4种主要病毒。这4种疾病均以腹泻、呕吐和厌食为主要特征，只根据临床症状和剖检病变极难区分，而且4种病毒的混合感染现象在临床上十分常见。因此，建立一种高效、灵敏和经济的检测方法对于猪群病毒性腹泻病的鉴别诊断与防控具有重要意义。

2、对待测样本进行分子生物学检测时主要的步骤有核酸提取纯化、反应液配制、核酸加样、核酸扩增检测。其中，核酸提取纯化的好坏程度、核酸提取纯化的速度是完成待测样本准确检测、快速检测的关键步骤。目前核酸提取纯化的办法多种多样，有酚氯仿抽提法、高盐沉淀法、离心柱法和生物磁珠法。这些方法本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.用于检测PEDV、TGEV、PDCoV和PoRV的试剂在制备诊断猪群病毒性腹泻病的试剂盒中的应用，其特征在于，所述试剂包括以下引物对：

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，还包括以下检测探针：

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，还包括用于检测猪内源性内参基因的引物对，其序列如SEQ ID NO:13～14所示；

4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，还包括扩增反应液，所述扩增反应液包括Tris缓冲液、Mg2+、核糖核酸单体、DNA聚合酶、逆转录酶和UDG酶。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述扩增反应液各组...

【技术特征摘要】

1.用于检测pedv、tgev、pdcov和porv的试剂在制备诊断猪群病毒性腹泻病的试剂盒中的应用，其特征在于，所述试剂包括以下引物对：

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，还包括以下检测探针：

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，还包括用于检测猪内源性内参基因的引物对，其序列如seq id no:13～14所示；

4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，还包括扩增反应液，所述扩增反应液包括tris缓冲液、mg2+、核糖核酸单体、dna聚合酶、逆转录酶和udg酶。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述扩增反应液各组分反应时的终浓度为：tris-hcl 5-15mmol/l、kcl 30-70nmol/l、mg2+3-7mmol/l、dntps0.2-0.6mmol/l、udg酶0.02-0.2u/ul、逆转录酶1-5u/ul和dna聚合酶0.05-0.3u/ul。

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【专利技术属性】
技术研发人员：黄涛，李婷婷，裴洁，金鑫，吕新慧，甘喆，库旭钢，田峰，谢军，
申请(专利权)人：湖北省动物疫病预防控制中心，
类型：发明
国别省市：