一种金顶侧耳种质资源SSR标记引物及指纹图谱的构建方法技术

技术编号：42877891 阅读：20 留言：0更新日期：2024-09-30 15:02

本发明专利技术属于分子生物学技术领域，具体为一种金顶侧耳种质资源SSR标记引物及指纹图谱的构建方法，所述SSR标记引物组包括序列分别如SEQ ID NO.1‑2所示的引物组一、如SEQ ID NO.3‑4所示的引物组二、如SEQ ID NO.5‑6所示的引物组三、如SEQ ID NO.7‑8所示的引物组四、如SEQ ID NO.9‑10所示的引物组五、如SEQ ID NO.11‑12所示的引物组六。本发明专利技术公开了6对SSR引物，对金顶侧耳种质资源进行遗传多样性研究和指纹图谱绘制，揭示不同金顶侧耳种质的遗传差异和亲缘关系。

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【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及分子生物学，具体涉及一种金顶侧耳种质资源ssr标记引物及指纹图谱的构建方法。

技术介绍

1、金顶侧耳(pleurotus citrinopilestus sing.)又称榆黄蘑、核桃菌、金顶蘑、黄蘑、黄金菇，是我国东北地区主栽的著名食药用菌，在全国范围内已经形成了一定的栽培规模，其子实体内含有多种对人体有益的元素，金顶侧耳适应性广，菌丝具有很强的抗杂能力，适合广泛的栽培生产。随着人们对金顶侧耳的喜爱程度增加，金顶侧耳的新品种选育和野生品种驯化的报道越来越多，但生产上同种异名、同名异种的现象十分普遍，缺乏高效、精准的鉴定技术，金顶侧耳的新品种保护及育种者权利得不到有效保护，严重影响了产业的可持续发展。因此，迫切需要开发一种操作性强、能准确鉴定金顶侧耳种质(品种)菌种的方法。

2、金顶侧耳种质资源评价已开展农艺性状(形态学)评价、生化评价和分子标记评价，但存在表型相似的种质难以区分；生化评价多采用酯酶同工酶谱带分析，易受温度等环境条件影响条带稳定性；分子标记仅采用dna序列随机扩增的通用分子标记，扩增条带较多，重复性差；基于金顶侧耳基因组开发的ssr分子标记数量丰富，而且分布均匀，多态性高，重复性好，检测遗传变异的能力强等特点，是一种理想的分子标记技术，广泛应用在作物的遗传连锁图谱构建、基因型鉴定、多样性研究、分子标记辅助选择育种等研究领域。金顶侧耳种质资源ssr分子标记指纹图谱构建工作尚未见报道，严重阻碍了金顶侧耳的种质资源开发及新品种选育的研究。

技术实现思路

1、为解决上述技术问题，本专利技术提供了一种金顶侧耳种质资源ssr标记引物及指纹图谱的构建方法。

2、一种金顶侧耳种质资源ssr标记引物组合，所述ssr标记引物组包括序列分别如seq id no.1-2所示的引物组一、如seq id no.3-4所示的引物组二、如seq id no.5-6所示的引物组三、如seq id no.7-8所示的引物组四、如seq id no.9-10所示的引物组五、如seqid no.11-12所示的引物组六。

3、一种试剂盒，所述试剂盒包括所述的金顶侧耳种质资源ssr标记引物组合。

4、所述的金顶侧耳种质资源ssr标记引物组合或所述的试剂盒在构建金顶侧耳种质资源指纹图谱中的应用。

5、所述的金顶侧耳种质资源ssr标记引物组合或所述的试剂盒在鉴定金顶侧耳种质资源中的应用。

6、一种金顶侧耳种质资源指纹图谱的构建方法，包括以下步骤：利用权利要求1所述的金顶侧耳种质资源ssr标记引物组合对金顶侧耳种质资源的dna进行pcr扩增，读取条带大小数据，筛选获得多态性片段，采用二进制方式将多态性片段转换成0、1矩阵数据，得到金顶侧耳种质资源指纹图谱。

7、优选的，所述pcr扩增的反应体系为模板dna 1±0.1μl、dntpmixture 5±0.1μl、正向引物0.8±0.1μl、反向引物0.8±0.1μl、超纯水加至11μl。

8、优选的，所述pcr扩增的反应条件为95℃预变性5min；95℃变性30s，适宜温度退火40s，72℃延伸2min，35个循环；72℃延伸10min。

9、所述的构建方法在鉴定金顶侧耳种质资源中的应用。

10、一种鉴定金顶侧耳种质资源的方法，包括以下步骤：利用权利要求1所述的金顶侧耳种质资源ssr标记引物组合，对待测金顶侧耳种质资源dna进行pcr扩增，对得到的pcr扩增条带与所述的构建方法构建得到的金顶侧耳种质资源指纹图谱进行比对，鉴定金顶侧耳种质资源的种类。

11、与现有技术相比，本专利技术的有益效果在于：

12、本专利技术金顶侧耳二维码分子鉴定方法，筛选出6对具有代表性的ssr核心引物，并以此为基础进行金顶侧耳二维码分子身份证的构建，融合了种质的菌株名称、菌株来源、菌株特性及分子身份证等信息，最终构建获得了二维码化的金顶侧耳分子身份证，这些产品身份证可以有效区分不同金顶侧耳种质，尤其对子实体外观近似产品的区分能力强。二维码化的分子身份证能够通过信息终端直接读取，为金顶侧耳种质的科学化鉴别和标准化管理提供便利，为新品种选育及资源高效利用与保护提供技术支持。

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【技术保护点】

1.一种金顶侧耳种质资源SSR标记引物组合，其特征在于，所述SSR标记引物组包括序列分别如SEQ ID NO.1-2所示的引物组一、如SEQ ID NO.3-4所示的引物组二、如SEQ IDNO.5-6所示的引物组三、如SEQ ID NO.7-8所示的引物组四、如SEQ ID NO.9-10所示的引物组五、如SEQ ID NO.11-12所示的引物组六。

2.一种试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1所述的金顶侧耳种质资源SSR标记引物组合。

3.权利要求1所述的金顶侧耳种质资源SSR标记引物组合或权利要求2所述的试剂盒在构建金顶侧耳种质资源指纹图谱中的应用。

4.权利要求1所述的金顶侧耳种质资源SSR标记引物组合或权利要求2所述的试剂盒在鉴定金顶侧耳种质资源中的应用。

5.一种金顶侧耳种质资源指纹图谱的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：利用权利要求1所述的金顶侧耳种质资源SSR标记引物组合对金顶侧耳种质资源的DNA进行PCR扩增，读取条带大小数据，筛选获得多态性片段，采用二进制方式将多态性片段转换成0、1矩阵数据，得到金顶侧耳种质资源指纹图谱。

6.根据权利要求5所述的金顶侧耳种质资源指纹图谱的构建方法，其特征在于，所述PCR扩增的反应体系为模板DNA 1±0.1μL、dNTP Mixture 5±0.1μL、正向引物0.8±0.1μL、反向引物0.8±0.1μL、超纯水加至11μL。

7.根据权利要求5所述的金顶侧耳种质资源指纹图谱的构建方法，其特征在于，所述PCR扩增的反应条件为95℃预变性5min；95℃变性30s，58℃退火40s，72℃延伸2min，35个循环；72℃延伸10min。

8.权利要求5或6或7所述的构建方法在鉴定金顶侧耳种质资源中的应用。

9.一种鉴定金顶侧耳种质资源的方法，其特征在于，包括以下步骤：利用权利要求1所述的金顶侧耳种质资源SSR标记引物组合，对待测金顶侧耳种质资源DNA进行PCR扩增，对得到的PCR扩增条带与权利要求5或6或7所述的构建方法构建得到的金顶侧耳种质资源指纹图谱进行比对，鉴定金顶侧耳种质资源的种类。

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【技术特征摘要】

1.一种金顶侧耳种质资源ssr标记引物组合，其特征在于，所述ssr标记引物组包括序列分别如seq id no.1-2所示的引物组一、如seq id no.3-4所示的引物组二、如seq idno.5-6所示的引物组三、如seq id no.7-8所示的引物组四、如seq id no.9-10所示的引物组五、如seq id no.11-12所示的引物组六。

2.一种试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1所述的金顶侧耳种质资源ssr标记引物组合。

3.权利要求1所述的金顶侧耳种质资源ssr标记引物组合或权利要求2所述的试剂盒在构建金顶侧耳种质资源指纹图谱中的应用。

4.权利要求1所述的金顶侧耳种质资源ssr标记引物组合或权利要求2所述的试剂盒在鉴定金顶侧耳种质资源中的应用。

5.一种金顶侧耳种质资源指纹图谱的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：利用权利要求1所述的金顶侧耳种质资源ssr标记引物组合对金顶侧耳种质资源的dna进行pcr扩增，读取条带大小数据，筛选获得多态性片段，采用...

【专利技术属性】
技术研发人员：马晓旭，崔婉华，姚方杰，方明，鲁丽鑫，郭鹏菲，王一然，
申请(专利权)人：吉林农业大学，
类型：发明
国别省市：

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