基于CRISPR/Cas的等温快速可视化检测辣椒轻斑驳病毒的试剂盒及其检测方法技术

本发明专利技术公开了基于CRISPR/Cas的等温快速可视化检测辣椒轻斑驳病毒的试剂盒及其检测方法。所述试剂盒用于检测辣椒轻斑驳病毒，包括RPA特异性引物、crRNA、NEBuffer2.1、RNAseinhibitor、DTT、DEPC水、LbCas12a(Cpf1)、荧光报告分子、RPAbufferA、RPAbufferB、阳性及阴性对照品。本发明专利技术的检测方法直接以待测样品的RNA为模板，采用所述引物和探针在等温环境下中对辣椒轻斑驳病毒的目的片段进行扩增并发生蓝光灯下肉眼可见的荧光信号。本发明专利技术显著提高了检测效率，节约了检测时间和成本，可以有效用于辣椒轻斑驳病毒的快速、准确鉴定。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于植物检疫，涉及生物检测技术，具体设计一种基于crispr/cas的等温快速可视化检测辣椒轻斑驳病毒的试剂盒以及应用该检测试剂盒鉴定辣椒轻斑驳病毒检测或者辣椒轻斑驳病毒的植物材料的方法。

技术介绍

1、辣椒轻斑驳病毒(pepper mild mottle virus,pmmov)属于杆状病毒科(virgaviridae)、烟草花叶病毒属(tobamovirus)，是一种正单链rna的杆状病毒。pmmov严重威胁辣椒、番茄等茄科作物的生产。近十年来，pmmov在我国多个地区的辣椒和番茄上都有该病毒的报道，并有发生危害区域扩大、发生面积逐年增加的趋势，对辣椒、番茄的生产造成重大损失。

2、pmmov虽在植物间不易介体传播，但鉴于其在植物体中的分布情况，该病毒很容易通过种传和汁液摩擦传播。带毒的种子以及被感染的植株是重要的传染源，其中种子和花粉带毒是其远距离传播的主要途径。此外，人类粪便中的辣椒轻斑驳病毒也具有传染性，即使常规堆肥也难以彻底杀灭植物残体、粪便中的辣椒轻斑驳病毒。叶片在被侵染后或表现症状不明显，或出现褪绿斑驳和花叶症状；植株本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.用于鉴定辣椒轻斑驳病毒的组合物，所述组合包括RT-RPA引物对、crRNA探针和荧光报告分子FQ，所述RT-RPA引物对由特异引物PMMoV-F、引物PMMoV-R成；

2.权利要求1所述的组合物对在如下b1)-b8)中任一所述的应用：

3.含有权利要求1所述组合物的试剂盒。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，还包括LbCas12a(Cpf1)。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述LbCas12a(Cpf1)与crRNA探针的摩尔比例为1:5。

6.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述LbCa...

【技术特征摘要】

1.用于鉴定辣椒轻斑驳病毒的组合物，所述组合包括rt-rpa引物对、crrna探针和荧光报告分子fq，所述rt-rpa引物对由特异引物pmmov-f、引物pmmov-r成；

2.权利要求1所述的组合物对在如下b1)-b8)中任一所述的应用：

3.含有权利要求1所述组合物的试剂盒。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，还包括lbcas12a(cpf1)。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述lbcas12a(cpf1)与crrna探针的摩尔比例为1:5。

6.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述lbcas12a(cpf1)与crrna探针的终浓度为分别为200nm和1000nm；荧光报告分子fq终浓度为400nm。

7.权利要求3-6任一所述试...

【专利技术属性】
技术研发人员：张永江，赵振兴，范奇璇，董铮，王思元，
申请(专利权)人：中国检验检疫科学研究院，
类型：发明
国别省市：