用于实时侧流测定的一锅式病原体检测系统和方法技术方案

本发明专利技术提供了整合了高特异性测定的基于LAMP的一锅式病原体检测系统和方法，用于在整个LAMP反应过程完成之前鉴别分析物中的真阳性样品，以缩短反应时间并减少由于LAMP反应中非特异性扩增或信号错误(例如，样品的pH值太高)而导致假阳性结果的可能性。本发明专利技术在LAMP反应的比色和/或荧光方面的结果解释中整合了免疫层析测定，例如侧流测定(LFA)，以实现实时病原体检测，从而在具有高特异性的情况下，提高其效率。本发明专利技术的检测系统采用单一的反应系统来实现多种结果解释，并且LAMP反应可以在能够产生恒定热量的简单平台上进行。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及适合单一反应中多检测模块、用于实时侧流测定系统的一锅式病原体检测。

技术介绍

1、自covid-19大流行病发生以来，世界各地的公共卫生和医疗系统一直面临着不断演变的新变体的挑战。此外，随着自2022年7月以来及最近的猴痘爆发给公共卫生管理带来更大的压力，开发一种简单且通用的现场即时检验技术已成为大流行病控制的重点。特别是，早期的猴痘病毒(monkeypox virus，mpxv)的爆发和流行发生在中非和西非地区，那里的标准实验室设施和资源并不总是可用或非常有限，因此，开发一种低成本的快速即时检测技术，对世界范围内大流行病的控制和治疗非常必要。

2、环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification，lamp)是指在恒温条件下，利用一种酶在短时间内对特异性靶基因进行扩增的新型核酸扩增技术。并且可以通过多种方法对其扩增产物进行实时检测，例如比浊法、比色法和荧光法。随着核酸扩增的不断进行，扩增产物的积累会引起溶液浊度、颜色或荧光的变化，因此可以通过这些变化获得实时结果，并可以减少lamp反本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.病原体检测系统，包括用于与分析物反应的反应混合物，所述反应混合物包含：

2.根据权利要求1所述的病原体检测系统，其中所述靶基因的扩增反应包括环介导等温扩增(LAMP)反应。

3.根据权利要求1所述的病原体检测系统，其中，除正向外引物(F3)和反向外引物(B3)外，其余引物中的一些引物被至少两种不同的标记物标记，从而使所述至少两种标记物包含在相应的扩增子中，作为在所述同时进行的免疫层析测定中与所述抗体特异性结合的标识物。

4.根据权利要求3所述的病原体检测系统，其中，所述两种不同的标记物选自包括以下的各种半抗原标记物中的任意两种：生物素、6-羧基荧光...

【技术特征摘要】

1.病原体检测系统，包括用于与分析物反应的反应混合物，所述反应混合物包含：

2.根据权利要求1所述的病原体检测系统，其中所述靶基因的扩增反应包括环介导等温扩增(lamp)反应。

3.根据权利要求1所述的病原体检测系统，其中，除正向外引物(f3)和反向外引物(b3)外，其余引物中的一些引物被至少两种不同的标记物标记，从而使所述至少两种标记物包含在相应的扩增子中，作为在所述同时进行的免疫层析测定中与所述抗体特异性结合的标识物。

4.根据权利要求3所述的病原体检测系统，其中，所述两种不同的标记物选自包括以下的各种半抗原标记物中的任意两种：生物素、6-羧基荧光素(fam)、异硫氰酸荧光素(fitc)、地高辛(dig)、四甲基若丹明(tamra)、二硝基苯和磺酰若丹明(texas red)，所述两种不同的标记物，对多个引物包括反向内引物(bip)或正向内引物(fip)和反向环(lb)引物的5′末端进行标记。

5.根据权利要求1所述的病原体检测系统，其中，所述荧光指示剂是一种或多种与所述靶基因的扩增产物结合而发射荧光信号的荧光染料，包括sybr绿、syto-82和syto-84。

6.根据权利要求1所述的病原体检测系统，所述靶基因的扩增产物，扩增子，能够通过半抗原-抗体结合被免疫层析测定检测，并且可以通过荧光染料的嵌入进行荧光检测，其中所述靶基因为分析物中病原体的靶基因。

7.根据权利要求6所述的病原体检测系统，所述病原体包括各种生物材料，包括病毒、细菌、真菌等病原体。

8.根据权利要求6所述的病原体检测系统，其中，所述分析物包含来自哺乳动物细胞的核酸样品。

9.根据权利要求1所述的病原体检测系统，其中，所述比色指示剂是选自各种染料的比色染料，主要用以检测反应混合物的变化，反应靶基因的扩增情况，包括ph指示剂和金属指示剂。...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨梦甦，B·阿亚勒，R·古纳万，武婉情，
申请(专利权)人：香港城市大学，
类型：发明
国别省市：