一种油茶胚性愈伤组织原生质体分离与体细胞杂交的方法技术

本发明专利技术公开了一种油茶胚性愈伤组织原生质体分离与体细胞杂交的方法，属于植物生物技术领域。本发明专利技术方法包括以下步骤：将油茶胚性愈伤组织进行0～48h黑暗预处理，真空气压负0.09～0MPa下抽真空0～15min，加入含纤维素酶R‑10、离析酶R‑10的酶液进行酶解；酶解后的溶液过滤后离心去上清，用W缓冲液对原生质体进行清洗和重悬，静置去上清，得到油茶胚性愈伤组织原生质体；将油茶胚性愈伤组织原生质体和油茶叶肉原生质体调整为两种原生质体数量相同的混合液，加入等体积的融合剂，诱导原生质体融合。通过本发明专利技术获得的原生质体产量达3.16×10<supgt;6</supgt;个/g·FW、活力高达93％以上，原生质体融合率达13.81％。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于植物生物，涉及原生质体的分离与体细胞杂交，更具体的涉及一种油茶胚性愈伤组织原生质体分离与体细胞杂交的方法。

技术介绍

1、油茶广泛分布于我国南方多省，是我国重要的木本油料树种，无论种植面积还是产量均居木本食用油料首位。茶油中油酸和亚油酸含量达80％以上，风味独特，营养丰富，耐贮藏，易被人体吸收，是优质食用油之一，故被誉为“东方橄榄油”。茶油的价值不仅体现在食用方面，还体现在医疗、保健和美容，具有消炎、降血脂、软化血管、抗氧化以及抗癌等多种功能。

2、目前油茶品种繁多，但高产、抗逆性强的品种仍然十分有限。由于油茶童期长且基因高度杂合，常规育种如选择育种与杂交育种效率低，亟需更加高效的育种途径，加快油茶育种进程。由于原生质体具有全能性，通过酶解法得到的原生质体进行培养，有获得再生植株的潜能。原生质体融合(体细胞杂交)技术也在不断发展，通过原生质体融合再生的杂交植株，有助于突破有性杂交障碍，进行远缘杂交实现胞质基因组的重组交换，染色体加倍，获得异源多倍体。因此，开展油茶原生质体分离和体细胞杂交研究，在油茶的品种改良上具有广阔的应用前景。本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种油茶胚性愈伤组织原生质体分离方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的油茶胚性愈伤组织原生质体分离方法，其特征在于：步骤(1)中，油茶胚性愈伤组织黑暗预处理的时间为24h。

3.根据权利要求1所述的油茶胚性愈伤组织原生质体分离方法，其特征在于：步骤(2)中，所述的酶液包含：5～15g/L纤维素酶R-10、2.5～10g/L离析酶R-10、0.6g/L MES、1.8g/L二水合氯化钙、0.055g/L二水合磷酸二氢钠、72.87g/L甘露醇，136.92g/L蔗糖、1/2MS培养基和250mg/L ME。

4.根据权利要求1所述...

【技术特征摘要】

1.一种油茶胚性愈伤组织原生质体分离方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的油茶胚性愈伤组织原生质体分离方法，其特征在于：步骤(1)中，油茶胚性愈伤组织黑暗预处理的时间为24h。

3.根据权利要求1所述的油茶胚性愈伤组织原生质体分离方法，其特征在于：步骤(2)中，所述的酶液包含：5～15g/l纤维素酶r-10、2.5～10g/l离析酶r-10、0.6g/l mes、1.8g/l二水合氯化钙、0.055g/l二水合磷酸二氢钠、72.87g/l甘露醇，136.92g/l蔗糖、1/2ms培养基和250mg/l me。

4.根据权利要求1所述的油茶胚性愈伤组织原生质体分离方法，其特征在于：步骤(2)中，负压下抽真空的真空气压大小为负0.03mpa，抽真空的时间为10min。

5.根据权利要求1所述的油茶胚性愈伤组织原生质体分离方法，其特征在于：步骤(2)中，所述的酶液中纤维素酶r-10和离析酶r-10的浓度分别为7.5g/l和5g/l；所...

【专利技术属性】
技术研发人员：肖诗鑫，何先域，袁德义，徐林杰，侯思璐，易丹丹，
申请(专利权)人：中南林业科技大学，
类型：发明
国别省市：