【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于植物基因工程，具体涉及一种抗旱基因crwrky40、扩增方法及在植物抗旱改良中的应用。
技术介绍
1、干旱是由于长期降雨量不足导致的土壤水分缺失，是世界上最严重的自然灾害类型之一。在世界范围内，干旱缺水对农业和社会造成的损失相当于其他自然灾害之和。柑橘是世界最重要的果树之一，被列为世界四大水果之首，中国是柑橘的原产地和主产地，自古以来就种植柑橘，有着悠久的栽培历史。我国的柑橘多在丘陵山地地区栽培，生长环境恶劣，且抵抗干旱条件差，遭受干旱的影响更大，水分是获得高产优质产品的主要限制因子之一。因此，如何提高柑橘抗旱性和获得高质高产成为一个紧要的课题。
2、干旱不仅严重限制了柑橘的栽培范围，而且是制约柑橘产业发展的主要非生物因素。因此，培育具有抗旱性的柑橘新品种对柑橘产业持续、稳定和健康发展极为重要。生物技术的快速发展为植物育种提供了新的途径，通过基因工程可以对作物进行定向的遗传改良，已经在培育作物抗逆新品种(材料)中展现出重要的利用价值。发掘和鉴定抗逆基因是利用基因工程创制抗逆转基因植株的前提和关键，但是目前对于抗旱基因的筛选量还很少，无法满足科研和生产需要。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种抗旱基因crwrky40、扩增方法及在植物抗旱改良中的应用，为植物抗逆分子设计育种提供新的基因资源，为实施绿色农业、节水农业提供新的遗传资源，有利于降低农业生产成本和实现环境友好。
2、本专利技术提供了一种抗旱基因crwrky40，所述抗旱基因c
3、本专利技术还提供了上述抗旱基因crwrky40编码的蛋白质。
4、优选的，所述蛋白质的氨基酸序列如seq id no.2所示。
5、本专利技术还提供了一组扩增上述抗旱基因crwrky40的引物对，包括核苷酸序列如seq id no.3的上游引物和核苷酸序列如seq id no.4的下游引物。
6、本专利技术还提供了利用上述引物对扩增上述抗旱基因crwrky40的方法，包括以下步骤：以柑橘的核酸分子为模板，将所述模板与引物对配制成pcr扩增体系进行pcr扩增，得所述抗旱基因crwrky40。
7、优选的，所述pcr扩增的程序包括：94℃预变性5min；94℃变性30s，58℃退火30s，72℃延伸1min，35个循环；72℃延伸10min。
8、本专利技术还提供了上述抗旱基因crwrky40、上述蛋白质或利用上述方法扩增得到的抗旱基因crwrky40在提高植物抗旱性中的应用。
9、本专利技术还提供了一种提高植物抗旱性的方法，包括在目标植物中表达或过表达上述抗旱基因crwrky40或利用上述方法扩增得到的抗旱基因crwrky40。
10、本专利技术还提供了上述抗旱基因crwrky40、上述蛋白质或利用上述方法扩增得到的抗旱基因crwrky40在培育不同抗旱性作物种质中的应用。
11、优选的，包括利用超表达或rnai干涉所述抗旱基因crwrky40的重组载体转化目标植物，获得增强或降低抗旱性的植物。
12、有益效果：本专利技术提供了一种抗旱基因crwrky40，隶属于wrky家族，其核苷酸序列seq id no.1所示，编码的蛋白的氨基酸序列如seq id no.2所示，包含957bp的开放阅读框(orf)，编码318个氨基酸，等电点为8.35，预测的分子量为35.29kda。
13、本专利技术实施例中根据图1所示流程，从极抗旱品种三湖红橘中分离并克隆得到所述抗旱基因crwrky40，在获得所述抗旱基因crwrky40的全长后，利用瞬时转化过表达烟草和病毒介导的基因沉默技术(vigs)在三湖红橘中干涉表达，获得的转基因植株经生物学功能验证，瞬时过表达烟草抗旱性增强，而干涉表达的植株抗旱性显著降低，表明本专利技术所克隆的crwrky40基因具有抗旱性的功能。
14、利用所述抗旱基因crwrky40能有效改善植物的耐旱能力，生产上可有效降低用水的消耗，降低生产成本；同时还可用于改善果树砧木材料，不存在转基因食品安全隐患，易于被公众接受认可。通过农杆菌介导将该基因导到植株中，鉴定其在干旱或离体脱水条件下的功能，为植物抗旱分子育种提供新的基因资源，为实施绿色农业、节水农业提供新的遗传资源。
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1.一种抗旱基因CrWRKY40，其特征在于，所述抗旱基因CrWRKY40的核苷酸序列如SEQID No.1所示。
2.权利要求1所述抗旱基因CrWRKY40编码的蛋白质。
3.根据权利要求2所述蛋白质，其特征在于，所述蛋白质的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。
4.一组扩增权利要求1所述抗旱基因CrWRKY40的引物对，其特征在于，包括核苷酸序列如SEQ ID No.3的上游引物和核苷酸序列如SEQ ID No.4的下游引物。
5.利用权利要求4所述引物对扩增权利要求1所述抗旱基因CrWRKY40的方法，其特征在于，包括以下步骤：以柑橘的核酸分子为模板，将所述模板与引物对配制成PCR扩增体系进行PCR扩增，得所述抗旱基因CrWRKY40。
6.根据权利要求5所述方法，其特征在于，所述PCR扩增的程序包括：94℃预变性5min；94℃变性30s，58℃退火30s，72℃延伸1min，35个循环；72℃延伸10min。
7.权利要求1所述抗旱基因CrWRKY40、权利要求2或3所述蛋白质或利用权利要求4～
8.一种提高植物抗旱性的方法，其特征在于，包括在目标植物中表达或过表达权利要求1所述抗旱基因CrWRKY40或利用权利要求4～6任一项所述方法扩增得到的抗旱基因CrWRKY40。
9.权利要求1所述抗旱基因CrWRKY40、权利要求2或3所述蛋白质或利用权利要求4～6任一项所述方法扩增得到的抗旱基因CrWRKY40在培育不同抗旱性作物种质中的应用。
10.根据权利要求9所述应用，其特征在于，包括利用超表达或RNAi干涉所述抗旱基因CrWRKY40的重组载体转化目标植物，获得增强或降低抗旱性的植物。
...【技术特征摘要】
1.一种抗旱基因crwrky40，其特征在于，所述抗旱基因crwrky40的核苷酸序列如seqid no.1所示。
2.权利要求1所述抗旱基因crwrky40编码的蛋白质。
3.根据权利要求2所述蛋白质，其特征在于，所述蛋白质的氨基酸序列如seq id no.2所示。
4.一组扩增权利要求1所述抗旱基因crwrky40的引物对，其特征在于，包括核苷酸序列如seq id no.3的上游引物和核苷酸序列如seq id no.4的下游引物。
5.利用权利要求4所述引物对扩增权利要求1所述抗旱基因crwrky40的方法，其特征在于，包括以下步骤：以柑橘的核酸分子为模板，将所述模板与引物对配制成pcr扩增体系进行pcr扩增，得所述抗旱基因crwrky40。
6.根据权利要求5所述方法，其特征在于，所述pcr扩增的程序包括：94℃预变性5min；9...
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