一种抗BP230高亲和力单克隆抗体及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种抗BP230高亲和力单克隆抗体及其应用，本发明专利技术采用BP230抗原蛋白对实验兔进行多次BP230蛋白免疫，免疫后进行血清效价测试；并分离效价高的兔子的脾脏组织和外周血的PBMC，进行单B细胞分选及培养；将阳性克隆提取RNA并反转录成cDNA，扩增其中全部的抗体VH、VL基因片段。将体外扩增的VH、VL基因片段克隆入含人IgG恒定区的表达载体上，进行重组表达。通过ELISA方法对重组抗体进行功能验证，最后从中筛选了特异性好、亲和力强的人源化单克隆抗体。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物医药，具体涉及一种抗bp230高亲和力单克隆抗体及其应用。

技术介绍

1、大疱性类天疱疮(bp)是一种在免疫系统攻击皮肤并引起水疱时产生的自身免疫性疾病，最常发病在60-80岁的老年人。此病特征性的临床表现为紧张性水疱和剧烈泛发的瘙痒症状。组织病理上，苏木精和曙红(he)染色可见表皮下裂隙伴随嗜酸性粒细胞浸润，直接免疫荧光(dif)可见沿基底膜带分布的线状沉积的自身抗体和/或补体，盐裂间接免疫荧光(ssiif)可见自身抗体和/或补体沉积在表皮侧。

2、患者血清中自身抗体的靶抗原是bp180和bp230，也称作bpag1和bpag2，这两种抗原的分子量分别是180kd和230kd。bp230是胞质内的半桥粒糖蛋白，主要有三种亚型：皮肤亚型(bpag1-e)，神经亚型(bpag1-n和bpag1-a)和肌肉亚型(bpag1-b)。它们在分子结构上有一定同源性，各自有组织特异性及不同的表位。大多数bp血清与bp230不同区段，尤其是c末端呈强阳性反应。bp230的n末端对其与半桥粒的结合以及与bp180、α6β4整合蛋白β4亚基的相本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种抗BP230高亲和力单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体的重链CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO.9所示，CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO.10所示，CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO.11所示；所述单克隆抗体的轻链CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO.12所示，CDR2的氨基酸序列为RAS，CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO.13所示。

2.根据权利要求1所述的抗BP230高亲和力单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体的重链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO.14所示；所述单克隆抗体的轻链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO.16所...

【技术特征摘要】

1.一种抗bp230高亲和力单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体的重链cdr1的氨基酸序列如seq id no.9所示，cdr2的氨基酸序列如seq id no.10所示，cdr3的氨基酸序列如seq id no.11所示；所述单克隆抗体的轻链cdr1的氨基酸序列如seq id no.12所示，cdr2的氨基酸序列为ras，cdr3的氨基酸序列如seq id no.13所示。

2.根据权利要求1所述的抗bp230高亲和力单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体的重链可变区氨基酸序列如seq id no.14所示；所述单克隆抗体的轻链可变区氨基酸序列如seq id no.16所示。

3.根据权利要求1所述的抗bp230高亲和力单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体的重链氨基酸序列如seq id no.15所示；所述单克隆抗体的轻链氨基酸序列如seq idno.17所示。

4.一种核酸分子，其特征在于，所述核酸分子编码权利要求1-3中任一项所述的抗bp230高亲和力单克隆...

【专利技术属性】
技术研发人员：王雅楠，杨衡，冯素英，李岷，梁桂熔，
申请(专利权)人：苏州方科生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：