基于ROP与ARGET ATRP双重信号放大策略的烟草花叶病毒RNA荧光试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了基于ROP与ARGET ATRP双重信号放大策略的烟草花叶病毒RNA荧光试剂盒，其检测原理为：先将probe 1固定在羧基磁珠上，通过BSA封闭磁珠的活性位点。然后加入tRNA，probe 1可特异性捕获目标物tRNA，再加入probe 2嵌段的引发剂多肽，其中的probe 2可与tRNA连接，从而多肽可引发ARGET ATRP反应将大量FA聚集在磁珠表面，使磁珠具有明显的荧光信号。本发明专利技术通过ROP与ARGET ATRP双重信号放大策略，成功构建了一种简单、快速、高灵敏度、特异性检测tRNA的荧光检测试剂盒。在最佳实验条件下，tRNA浓度的对数在0.1pM～10nM范围内与荧光信号强度之间呈对数线性相关，检测tRNA的检测限(LOD)低至6.25fM。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种基于rop与arget atrp双重信号放大策略的烟草花叶病毒rna(trna)荧光试剂盒及检测方法和应用，属于生物分析。

技术介绍

1、烟草花叶病毒(tmv)是一种直径为18nm、长度为300nm的单链杆状rna病毒，也是最常见的植物病毒之一。tmv除了能够感染烟草、辣椒和西红柿等经济作物外，还能感染地黄和太子参等药用植物，对全球农业经济造成巨大影响。被tmv感染的植株早期会出现叶片变厚、黄斑等症状，后期会造成植株萎缩甚至死亡，严重影响植物产量和质量。因此，在侵染植株的早期阶段检测tmv具有重要意义。目前，已经开发了多种检测tmv的方法，如酶联免疫吸附试验(elisa)、反转录聚合酶链反应(rt-pcr)、激光诱导击穿光谱(libs)、rt-环介导的等温扩增(rt-lamp)等。然而，这些方法存在一些缺点，如操作复杂，成本高，或必须由专业技术人员操作。

2、采用生物传感技术构建的生物传感器具有分析时间短，检测速度快，样品制备容易，可重复使用，成本低的优点。但根据单一目标对应单一报告单元的传统生物传感器往往无法满足超低水平目标本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种基于ROP与ARGET ATRP双重信号放大策略的烟草花叶病毒RNA荧光试剂盒，其特征在于，包括以下原料：羧基磁珠(MBs)、probe 1(cDNA-1)、BSA、probe 2-NCA-BMPs预制溶液、FA、CuBr2、Me6TREN、AA。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，还包括EDC、NHS、TE缓冲液、DMSO、PBST缓冲液、DEPC处理水。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，部分原料使用时需配制成溶液，其中，probe 1溶液的浓度为0.5μM，BSA溶液的浓度为0.01g/mL，FA溶液的浓度为10mM，CuBr2/...

【技术特征摘要】

1.一种基于rop与arget atrp双重信号放大策略的烟草花叶病毒rna荧光试剂盒，其特征在于，包括以下原料：羧基磁珠(mbs)、probe 1(cdna-1)、bsa、probe 2-nca-bmps预制溶液、fa、cubr2、me6tren、aa。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，还包括edc、nhs、te缓冲液、dmso、pbst缓冲液、depc处理水。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，部分原料使用时需配制成溶液，其中，probe 1溶液的浓度为0.5μm，bsa溶液的浓度为0.01g/ml，fa溶液的浓度为10mm，cubr2/me6tren溶液中cubr2的浓度为10mm，me6tren的浓度为12mm，配制cubr2/me6tren溶液和fa溶液的溶剂为dmso，aa溶液的浓度为2mm，edc溶液的浓度为40mm，nhs溶液的浓度为10mm，配制edc溶液与nhs溶液的溶剂为te缓冲液，te缓冲液规格为1×te，ph 7.4，pbst缓冲液的浓度为0.01m，depc处理水浓度为0.1％。

4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述probe 2-nca...

【专利技术属性】
技术研发人员：马乐乐，王振东，王仪龙，柯圆梦，王贺森，王剑锋，杨怀霞，
申请(专利权)人：河南中医药大学，
类型：发明
国别省市：