一种L-天冬氨酸酶突变体及其应用制造技术

本发明专利技术提供一种L‑天冬氨酸酶突变体，是将SEQ ID NO.1中第221位的苏氨酸替换为谷氨酰胺。本发明专利技术还提供其在制备L‑天冬氨酸中的应用。本发明专利技术的L‑天冬氨酸酶突变体T221Q的比酶活为170.6U·mg<supgt;‑1</supgt;，与野生型接近；最适温度及最适pH无变化；热稳定性显著提高(在50℃下处理30min后，突变体T221Q残余酶活为92.16％，而野生型残余酶活仅为52.9％)。突变体T221Q单酶工程菌株转化速率较出发菌株有明显提升，2h转化率由起始菌株的67.1％提升至93.2％，转化完成时间由5h提前至3h，生产力由47.92g·L<supgt;‑1</supgt;·h<supgt;‑1</supgt;提升至79.86g·L<supgt;‑1</supgt;·h<supgt;‑1</supgt;。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于酶工程，具体涉及一种l-天冬氨酸酶突变体及其应用。

技术介绍

1、l-天冬氨酸是二十种基本氨基酸之一，参与生物体内的多种代谢通路，在食品、医药、化工等领域都有着广泛应用。l-天冬氨酸的合成方法主要为化学合成法和酶催化法，其中化学合成法需要在高温高压下反应，对设备要求较高，且产物为外消旋体dl-天冬氨酸，分离纯化困难。相较而言，酶催化法具有反应条件温和、专一性强、产物纯度高、绿色环保等优点，是今后的主要发展方向。酶催化法可分为单酶法和双酶偶联法，单酶法通过l-天冬氨酸酶(l-aspartase ammonia-lyase，aspa，ec 4.3.1.1)催化底物富马酸加氨生成l-天冬氨酸；双酶偶联法通过将马来酸顺反异构酶(maleate cis-trans isomerase，maia，ec5.2.1.1)和l-天冬氨酸酶串联，以更廉价的底物马来酸生成l-天冬氨酸。l-天冬氨酸酶作为直接生成l-天冬氨酸的关键酶，对其生产有着至关重要的作用。

技术实现思路

1、为了解决现有技术中存在的问题，本专利技本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种L-天冬氨酸酶突变体，其特征在于：是将SEQ ID NO.1中第221位的苏氨酸替换为谷氨酰胺。

2.编码权利要求1所述L-天冬氨酸酶突变体的核苷酸序列。

3.根据权利要求2所述的核苷酸序列，其特征在于：所述的核苷酸序列为序列表中SEQID NO.4。

4.包含权利要求2或3所述核苷酸序列的重组表达载体；

5.包含权利要求4所述重组表达载体的基因工程菌；

6.权利要求1所述的L-天冬氨酸酶突变体、权利要求2或3所述的核苷酸序列、权利要求4所述的重组表达载体、权利要求5所述的基因工程菌在制备L-天冬氨酸中的应用。

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【技术特征摘要】

1.一种l-天冬氨酸酶突变体，其特征在于：是将seq id no.1中第221位的苏氨酸替换为谷氨酰胺。

2.编码权利要求1所述l-天冬氨酸酶突变体的核苷酸序列。

3.根据权利要求2所述的核苷酸序列，其特征在于：所述的核苷酸序列为序列表中seqid no.4。

4.包含权利要求2或3所述核苷酸序列的重组表达载体；

5.包含权利要求4所述重组表达载体的基因工程菌；

6.权利要求1所述的l-天冬氨酸酶突变体、权利要求2或3所述的核苷酸序列、权利要求4所述的重组表达载体、权利要求5所述的基因工程菌在制备l-天冬氨酸中的...

【专利技术属性】
技术研发人员：张玉卓，董永群，刘中美，赵龙梅，崔晓明，孙德春，
申请(专利权)人：河北协同环保科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：