一种CFB基因修饰的非人动物制造技术

本发明专利技术提供了一种表达人或嵌合(例如，人源化)CFB蛋白的非人动物及其使用方法。本发明专利技术还提供了一种非人动物基因组、人源化CFB基因以及包含非人动物基因组、人源化CFB基因的细胞、组织、器官或非人动物。本申请获得的非人动物成功表达人或人源化CFB蛋白，该蛋白可以被CFD切割，结合C3b，并发挥在人体内相似的作用，且本申请获得的非人动物肾功能状态完好、血生化指标正常，更难得的是，该非人动物并未出现本领域已知的在某些其它转基因小鼠中观察到的潜在疾病。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术提供一种表达人或嵌合(例如，人源化)cfb蛋白的非人动物及其使用方法。

技术介绍

1、传统的药物研发通常使用体外筛选方法，然而这些筛选方法无法提供机体环境(如肿瘤微环境、基质细胞、细胞外基质成分和免疫细胞相互作用等)，导致药物开发失败率较高。此外，鉴于人与动物之间的差异，使用常规实验动物进行体内药理试验获得的试验结果可能无法反映真实的疾病状态和靶向部位的相互作用，导致许多临床试验的结果与动物实验结果存在显著差异。

2、因此，开发适合人抗体筛选和评价的人源化动物模型将显著提高新药开发效率，降低药物研发成本。

3、但是，人源化动物模型的构建十分困难，例如非专利文献：generation andutility of genetically humanized mouse models(scheer n,snaith m,wolf cr,seibler j.,drug discovery today；18(23-24):1200-11,2013)公开了任何基因的人源化都带有一定的风险，即便采用精心设计的策略也无法确保人基因在动物体本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种基因修饰的非人动物的构建方法，其特征在于，所述非人动物的基因组包含至少一条染色体，所述染色体包含编码人或嵌合补体因子B(CFB)蛋白的核苷酸序列。

2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述编码人或嵌合CFB蛋白的核苷酸序列的表达通过调控元件进行调控，所述的调控元件为内源调控元件或人源调控元件。

3.根据权利要求1-2任一所述的构建方法，其特征在于，所述的人或嵌合CFB蛋白包含SEQ ID NO：2或其26-764位或包含与SEQ ID NO：2或其26-764位的同源性为至少70％、75％、80％、85％、90％、95％或99％的氨基酸序列，或包...

【技术特征摘要】

1.一种基因修饰的非人动物的构建方法，其特征在于，所述非人动物的基因组包含至少一条染色体，所述染色体包含编码人或嵌合补体因子b(cfb)蛋白的核苷酸序列。

2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述编码人或嵌合cfb蛋白的核苷酸序列的表达通过调控元件进行调控，所述的调控元件为内源调控元件或人源调控元件。

3.根据权利要求1-2任一所述的构建方法，其特征在于，所述的人或嵌合cfb蛋白包含seq id no：2或其26-764位或包含与seq id no：2或其26-764位的同源性为至少70％、75％、80％、85％、90％、95％或99％的氨基酸序列，或包含与seq id no：2或其26-764位的差异不超过10、9、8、7、6、5、4、3、2或不超过1个氨基酸的氨基酸序列，或包含与seq id no：2或其26-764位所示的一个或两个以上氨基酸的取代、缺失和/或插入。

4.根据权利要求1-3任一所述的构建方法，其特征在于，所述非人动物内源cfb蛋白不表达或与野生型动物中cfb相比表达水平降低。

5.一种基因修饰的非人动物的构建方法，其特征在于，在非人动物内源cfb基因座处，用包含人cfb的核苷酸序列替换内源cfb基因。

6.根据权利要求5所述的构建方法，其特征在于，所述人cfb的核苷酸序列的表达通过调控元件进行调控，所述的调控元件为内源调控元件或人源调控元件；

7.根据权利要求5所述的构建方法，其特征在于，所述非人动物的内源cfb蛋白不表达或与野生型动物中cfb相比表达水平降低。

8.根据权利要求5-7任一所述的构建方法，其特征在于，所述人cfb的核苷酸序列包含人cfb基因的外显子1的部分至外显子18的部分；优选的，包含人cfb基因的编码区的核苷酸序列；进一步优选包含人cfb基因的起始密码子至终止密码子的核苷酸序列。

9.根据权利要求8所述的构建方法，其特征在于，所述的人cfb的核苷酸序列还包含人cfb的5’utr和/或3’utr，进一步还包含人cfb的5’utr外侧上游至少50bp连续核苷酸和/或人cfb的3’utr外侧下游至少50bp连续核苷酸。

10.根据权利要求5-9任一所述的构建方法，其特征在于，所述的人cfb的核苷酸序列包括人cfb的5’utr及其外侧上游至少50bp连续核苷酸、人cfb基因的起始密码子至终止密码子的核苷酸序列和人cfb的3’utr及其外侧下游至少50bp连续核苷酸。

11.根据权利要求5-10任一所述的构建方法，其特征在于，所述人cfb的核苷酸序列包含seq id no：7或39的核苷酸序列，或包含与seq id no：7或39同源性为至少70％、75％、80％、85％、90％、95％或99％的核苷酸序列，或包含与seq id no：7或39的差异不超过50、40、30、20、10、9、6、3或1bp核苷酸的核苷酸序列，或包含与seq id no：7或39所示的一个或两个以上核苷酸的取代、缺失和/或插入的核苷酸序列。

12.根据权利要求5-11任一所述的构建方法，其特征在于，内源cfb基因外显子2至外显子17被替换；优选被替换的内源cfb基因还包括外显子1的部分、内含子1的全部和/或内含子17的部分；进一步优选被替换的内源cfb基因还包括外显子18的部分。

13.根据权利要求5-1...

【专利技术属性】
技术研发人员：张淑金，周小飞，张赞，
申请(专利权)人：百奥赛图北京医药科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：