【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于单细胞测序方法领域，具体涉及一种用于高通量测序的大规模单细胞全基因组液相编码方法。
技术介绍
1、随着科学研究和工程技术的发展，核酸测序的空间分辨率和实验规模在不断攀升。高通量测序技术(即第二代测序技术)以核酸分子编码为特征，构建大批量混合的测序文库，达到了超高通量，被广泛应用在大量样本的测序研究中。在分子生物学技术的发展过程中，涌现了大量针对微量至于单个细胞的核酸测序分析方法，能够得到作为独立单元的细胞的遗传物质信息和细胞之间遗传信息的差异，为认识生命规律和解读生命过程提供了强有力的支持。
2、大规模单细胞并行测序是一种基于高通量测序的新型测序策略，引入了单细胞文库编码机制，使单细胞测序真正具有了大规模应用价值。这种技术在测序文库构建阶段将大量单细胞分隔并特异地标记测序编码，随后混合这些样本并进行高通量测序和分析。由于每个细胞都具有彼此不同的编码，通过解码可以得到一个样本中大量单细胞的各自的核酸序列信息。大规模单细胞并行编码测序仅需一次测序就能得到数以万计的单细胞异质性信息，是对传统测序技术的重要革新和未来的...
【技术保护点】
1.一种用于高通量测序的大规模单细胞全基因组液相编码方法，其特征在于，用乳液将大量单细胞基因组并行分隔，在并行的、不含有固体微球的液滴中完成全基因组编码测序文库构建反应所需的包含核酸释放、全基因组核酸转座、核酸末端补齐、初步核酸扩增步骤，再将液滴进行破乳回收得到编码测序文库，实现对每个细胞基因组的编码。
2.根据权利要求1所述的用于高通量测序的大规模单细胞全基因组液相编码方法，其特征在于，在液滴多步骤反应过程中，包括所述核酸释放、全基因组核酸转座、核酸末端补齐、初步核酸扩增，通过至少一次液滴融合实现反应不同步骤的体系配制；破乳前所有液滴中含有已编码基因组的...
【技术特征摘要】
1.一种用于高通量测序的大规模单细胞全基因组液相编码方法，其特征在于，用乳液将大量单细胞基因组并行分隔，在并行的、不含有固体微球的液滴中完成全基因组编码测序文库构建反应所需的包含核酸释放、全基因组核酸转座、核酸末端补齐、初步核酸扩增步骤，再将液滴进行破乳回收得到编码测序文库，实现对每个细胞基因组的编码。
2.根据权利要求1所述的用于高通量测序的大规模单细胞全基因组液相编码方法，其特征在于，在液滴多步骤反应过程中，包括所述核酸释放、全基因组核酸转座、核酸末端补齐、初步核酸扩增，通过至少一次液滴融合实现反应不同步骤的体系配制；破乳前所有液滴中含有已编码基因组的液滴数量比例不少于0.5％，单次并行完成基因组测序文库制备的细胞数不少于1×103个，测序数据中特异读取数不少于5×103条的编码基因组个数不少于1×102个。
3.根据权利要求1所述的用于高通量测序的大规模单细胞全基因组液相编码方法，其特征在于，所述乳液为油包水体系，包括分散相和连续相，所述分散相是包含生化反应所需物质的水溶液或悬浊液，所述连续相是与水互不相溶的油相，连续相主要成分优选为含氟烷烃类油、矿物油中的任一种；两相体系中均含有表面活性剂。
4.根据权利要求2所述的用于高通量测序的大规模单细胞全基因组液相编码方法，其特征在于，所述至少一次液滴融合的步骤中至少将两种内容物不同的液滴进行分组配对，通过调节液滴输入速度并使配对的液滴彼此接触并融合，融合液滴输出频率不小于10hz，输出液滴直径在10-200μm。
5.根据权利要求1所述的用于高通量测序的大规模单细胞全基因组液相编码方法，其特征在于，所述将大量单细胞基因组并行分隔时，基因组核酸与组蛋白是结合状态、但未与转座酶结合；被分隔的是未经彻底裂解或片段化的单细胞或单细胞核，输入量数量不低于1×104...
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