一种结核分枝杆菌高效率核酸提取方法技术

本发明专利技术提供了一种结核分枝杆菌高效率核酸提取方法，具体步骤为在样本离心后加入专有的液化超声液对样本进行液化超声，然后经过离心去上清并加裂解液重悬样本，经过磁珠法提取后获得纯净结核分枝杆菌核酸。该液化超声液包括愈甘醚、NaOH和裂解液，其中裂解液包括异硫氰酸胍、Triton X‑100、乙二胺四乙酸二钠、三羟甲基氨基甲烷盐酸盐、L‑二硫苏糖醇、异丙醇。与其他方法相比，通过本发明专利技术处理的结核类样本，能够显著提升结核分枝杆菌检出的阳性率，显著提升所提取结核分枝杆菌的核酸浓度，为后继试验提供更多和更高质量的核酸。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及分子生物学领域和临床检测诊断领域，尤其涉及一种结核分枝杆菌核酸提取方法。

技术介绍

1、我国目前针对结核的诊断方法主要包括痰涂片抗酸染色、痰培养方法、结核分枝杆菌核酸检测和干扰素释放试验等，虽然这些技术已经在临床检测和对结核分枝杆菌感染的监测等方面被广泛应用，但检出率相对较低，检出时间长，操作过程复杂，易受到其他疾病干扰等因素影响，这些检测手段已不能满足临床需求。

2、目前，临床上对菌阴性肺结核(指患者在进行痰液涂片时或是在进行一次的痰液培养阴性的活动性肺结核)缺乏相对可靠的检测方法，菌阴性肺结核在初期属于非传染性结核病，但若对于部分体质较差的患者，多表现为与呼吸道症状相似的临床症状，如咳嗽、咳痰及严重者出现咯血的症状，故多数患者因误诊而导致病情加重，最终因为治疗延误使其转为阳性肺结核。

3、市场上已经有多种商业化的结核分枝杆菌核酸提取产品，但由于种种原因使得其分子诊断结果与临床诊断结果相差很大，主要由于分枝杆菌具有较厚的细胞壁，脂质含量高，基因组提取困难，且容易聚团，用一般的细菌基因组提取试剂盒效果不是很好，甚至进口本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种结核分枝杆菌高效率核酸提取方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述超声液包括如下重量份的组分：2％NaOH，300mM愈甘醚，前两种组分混合后，用稀释3倍裂解液定容至所需要的体积；所述裂解液由如下组分组成：2.83uM异硫氰酸胍，2％Triton X-100，0.01639uM乙二胺四乙酸二钠，33uM三羟甲基氨基甲烷盐酸盐，0.053uM L-二硫苏糖醇，33％异丙醇。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S2采用超声波破碎仪进行液化超声，所述超声波破碎仪配备适配50ml离心管的变幅杆、可调节升降器和大功率超...

【技术特征摘要】

1.一种结核分枝杆菌高效率核酸提取方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述超声液包括如下重量份的组分：2％naoh，300mm愈甘醚，前两种组分混合后，用稀释3倍裂解液定容至所需要的体积；所述裂解液由如下组分组成：2.83um异硫氰酸胍，2％triton x-100，0.01639um乙二胺四乙酸二钠，33um三羟甲基氨基甲烷盐酸盐，0.053um l-二硫苏糖醇，33％异丙醇。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤s2采用超声波破碎仪进行液化超声，所...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘涛，何熲，丁安，王怡瑞，王李冰，黄颖，
申请(专利权)人：上海康黎诊断技术有限公司，
类型：发明
国别省市：