【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及dpp-iv抑制肽，尤其是涉及一种干腌火腿源dpp-iv抑制肽及其制备、鉴定方法和应用。
技术介绍
1、糖尿病是一种由于胰岛素分泌缺陷或胰岛素作用障碍所导致、以高血糖为特征的代谢性疾病。根据idf糖尿病图谱(2021年)报告称，有10.5％的成年人口(20-79岁)患有糖尿病。据idf预测，到2045年，每8个成年人中就有1人(约7.83亿人)患有糖尿病，增幅达46％。糖尿病的危害包括其引发的一系列并发症：失明、心脏病、肾衰竭、皮肤溃疡、足部麻木和痴呆症等。目前，糖尿病的主要治疗制剂包括：二甲双胍、噻唑烷二酮类、二肽基肽酶-4抑制剂、磺酰脲类、格列奈德、α-葡萄糖苷酶抑制剂、胰高血糖素样肽-1受体激动剂—glp1ra。
2、目前2型糖尿病的一个主要治疗靶点是二肽基肽酶-iv(dpp-iv)，它能使肠促胰岛素激素--胰高血糖素样肽-1(glp-1)发生分解。glp-1可以增强葡萄糖诱导的胰岛素分泌并抑制胰高血糖素分泌，以此来调节人体的血糖水平。目前市面上常见的dpp-iv抑制类药物主要有：西格列汀、沙格列汀、维格列汀、利格列汀和阿格列汀等，但是以上抑制剂存在许多不良反应，如胃肠道不良症状、呼吸道感染、皮肤疾病等。
3、因此，开发源自于天然食物、无副作用或副作用较小的dpp-4抑制剂被广泛关注。已有研究从油菜籽，豌豆，鹰嘴豆和西兰花等植物中发掘出多条dpp-iv抑制肽，此外水生动物和鸡蛋中同样具有dpp-iv抑制潜力的多肽。但是这些食源性dpp-iv抑制肽需要使用蛋白酶酶解产生。
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5、目前，活性肽的制备和鉴定方法，是通过实验室实验逐步纯化活化肽，具有劳动密集、耗时、成本高的缺陷，很难以高通量的方式应用。因此，开发快速、高效的dpp-iv抑制肽鉴定方法具有重要的现实意义。
技术实现思路
1、本专利技术的目的是提供一种干腌火腿源dpp-iv抑制肽及其制备、鉴定方法和应用，以解决目前dpp-iv抑制肽的鉴定方法具有劳动密集、耗时、成本高的缺陷，并提供一种干腌火腿源的dpp-iv抑制肽。
2、为实现上述目的，本专利技术提供一种dpp-iv抑制肽的鉴定方法，具体步骤如下：
3、s1、将得到的多肽使用web ofscience数据库检索和/或筛选；
4、s2、对步骤s1筛选出的肽段进行活性预测；
5、s3、对步骤s2筛选出的肽段进行疏水性预测；
6、s4、对步骤s3筛选出的肽段进行细胞穿透性预测；
7、s5、对步骤s4筛选出的肽段进行毒性预测；
8、s6、对步骤s5筛选出的肽段进行吸收性能、代谢性能预测；
9、s7、采用biopep数据库katedra biochemii(uwm.edu.pl)对步骤s6获得的肽段进行综合模拟评分，选择综合模拟评分排名靠前的多肽为dpp-iv抑制肽；
10、s8、将步骤s7得到的dpp-iv抑制肽进行分子对接模拟，筛选获得活性最佳的dpp-iv抑制肽。
11、优选的，所述步骤s1中检索和/或筛选的条件为：n末端第二位氨基酸为pro或ala、长度为3-8个氨基酸的肽；所述步骤s2中对肽段进行活性预测的工具为peptide ranker或其他具有肽段活性预测功能的工具，选用peptide ranker评分>0.5的活性肽。
12、优选的，所述步骤s3中对肽段进行疏水性预测的工具为https://www.novopro.cn/tools/calc_peptide_property.html或其他具有肽段疏水性预测功能的工具，选留疏水性高的多肽；所述步骤s4中对肽段进行细胞穿透性预测的工具为cpppred或其他具有肽段细胞穿透性预测功能的工具，选留细胞穿透性较好的肽段。
13、优选的，所述步骤s5中对肽段进行毒性预测的工具为https://webs.iiitd.edu.in/raghava/toxinpred或其他具有肽段毒性预测功能的工具，选留无毒性的多肽。
14、优选的，所述步骤s6中对肽段进行吸收性能、代谢性能预测使用的工具为admet预测工具，所述admet预测工具的网址为http://lmmd.ecust.edu.cn/admetsar2，以人体小肠消化、cpy450和急性口服毒性作为预测指标，选留吸收性能和代谢性能均较好的多肽。
15、一种如上所述的鉴定方法在dpp-iv抑制肽鉴定中的应用。
16、利用上述鉴定方法获得的干腌火腿dpp-iv抑制肽，所述dpp-iv抑制肽为leu-pro-pro-asp-tyr；tyr-ala-asp-phe-lys；leu-pro-val-his-phe-tyr；arg-pro-pro-trp-val-thr；ala-pro-pro-his-leu-phe；tyr-pro-leu-ala-lys-gly。
17、一种如上所述的干腌火腿dpp-iv抑制肽在2型糖尿病治疗中的应用。
18、一种如上所述的干腌火腿dpp-iv抑制肽的制备方法，步骤如下：
19、(1)去除徽派干腌火腿中的肌肉脂肪和筋膜组织，将剩余部分绞碎后，加入盐酸，冰浴条件下匀浆，离心取上清，采用膜分离技术进行分离，将分子量<3kda的截留物干燥即得粗肽粉；
20、(2)将粗肽粉复溶配置成粗肽液，依次用水相微孔滤膜过滤、大孔树脂层析柱分离纯化、葡聚糖凝胶排阻层析分离纯化，获得hpf-1、hpf-2和hpf-33种组分；
21、(3)选取hpf-2进行高分辨质谱鉴定多肽氨基酸组成，然后采用权利要求1-7任一项所述的鉴定方法进行鉴定，即可获得徽派干腌火腿dpp-iv抑制肽。
22、优选的，所述步骤(1)中的干燥采用冷冻干燥；所述步骤(2)中水相微孔滤膜的孔径为0.45μm，大孔径树脂层析柱分离纯化的条件为：上样体积为20ml，洗脱流速为5-10ml/min，洗脱组分时先用超纯水洗脱，待基线平稳时再用50％乙醇洗脱；采用葡聚糖凝胶排阻层析分离纯化的条件为：在分离纯化前将组分在超纯水中重新溶解，然后应用于sephadexg-30预装柱分离纯化，流速为24ml/h，上样体积2ml，在214nm波长下测量吸光度。
23、因此，本专利技术提供的一种干腌火腿源dpp-iv抑制肽及其制备、鉴定方法和应用，其具体技术效果如下：
24、(1)本专利技术提供的dpp-iv抑制肽的鉴定方法，通过将有效数据库与分子对接模拟dpp-iv抑制肽的主要作用靶点相结合，可快速获得抑制活性最佳的dpp-iv抑制肽，实现对多肽的快速、高通量检测，耗时短，效率高，成本低，准确性好，检测更全面，实用性好，可以用于dpp-iv抑本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种DPP-IV抑制肽的鉴定方法，其特征在于，具体步骤如下：
2.根据权利要求1所述的一种DPP-IV抑制肽的鉴定方法，其特征在于，所述步骤S1中检索和/或筛选的条件为：N末端第二位氨基酸为Pro或Ala、长度为3-8个氨基酸的肽；所述步骤S2中对肽段进行活性预测的工具为PeptideRanker或其他具有肽段活性预测功能的工具，选用PeptideRanker评分>0.5的活性肽。
3.根据权利要求1所述的一种DPP-IV抑制肽的鉴定方法，其特征在于：所述步骤S3中对肽段进行疏水性预测的工具为https://www.novopro.cn/tools/c alc_peptide_property.html或其他具有肽段疏水性预测功能的工具，选留疏水性高的多肽；所述步骤S4中对肽段进行细胞穿透性预测的工具为CPPpred或其他具有肽段细胞穿透性预测功能的工具，选留细胞穿透性较好的肽段。
4.根据权利要求1所述的一种DPP-IV抑制肽的鉴定方法，其特征在于：所述步骤S5中对肽段进行毒性预测的工具为https://webs.iiitd.edu
5.根据权利要求1所述的一种DPP-IV抑制肽的鉴定方法，其特征在于：所述步骤S6中对肽段进行吸收性能、代谢性能预测使用的工具为ADMET预测工具，所述ADMET预测工具的网址为http://lmmd.ecust.edu.cn/admetsar2，以人体小肠消化、CPY450和急性口服毒性作为预测指标，选留吸收性能和代谢性能均较好的多肽。
6.一种如权利要求1-5任一项所述的鉴定方法在DPP-IV抑制肽鉴定中的应用。
7.利用权利要求1-5任一项所述的鉴定方法获得的干腌火腿DPP-IV抑制肽，其特征在于：所述DPP-IV抑制肽为Leu-Pro-Pro-Asp-Tyr；Tyr-Ala-Asp-Phe-Lys；Leu-Pro-Val-His-Phe-Tyr；Arg-Pro-Pro-Trp-Val-Thr；Ala-Pro-Pro-His-Leu-Phe；Tyr-Pro-Leu-Ala-Lys-Gly。
8.一种如权利要求7所述的干腌火腿DPP-IV抑制肽在2型糖尿病治疗中的应用。
9.一种如权利要求7所述的干腌火腿DPP-IV抑制肽的制备方法，其特征在于，步骤如下：
10.根据权利要求7所述的一种干腌火腿DPP-IV抑制肽的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中的干燥采用冷冻干燥；所述步骤(2)中水相微孔滤膜的孔径为0.45μm，大孔径树脂层析柱分离纯化的条件为：上样体积为20mL，洗脱流速为5-10mL/min，洗脱组分时先用超纯水洗脱，待基线平稳时再用50％乙醇洗脱；采用葡聚糖凝胶排阻层析分离纯化的条件为：在分离纯化前将组分在超纯水中重新溶解，然后应用于SephadexG-30预装柱分离纯化，流速为24mL/h，上样体积2mL，在214nm波长下测量吸光度。
...【技术特征摘要】
1.一种dpp-iv抑制肽的鉴定方法，其特征在于，具体步骤如下：
2.根据权利要求1所述的一种dpp-iv抑制肽的鉴定方法，其特征在于，所述步骤s1中检索和/或筛选的条件为：n末端第二位氨基酸为pro或ala、长度为3-8个氨基酸的肽；所述步骤s2中对肽段进行活性预测的工具为peptideranker或其他具有肽段活性预测功能的工具，选用peptideranker评分>0.5的活性肽。
3.根据权利要求1所述的一种dpp-iv抑制肽的鉴定方法，其特征在于：所述步骤s3中对肽段进行疏水性预测的工具为https://www.novopro.cn/tools/c alc_peptide_property.html或其他具有肽段疏水性预测功能的工具，选留疏水性高的多肽；所述步骤s4中对肽段进行细胞穿透性预测的工具为cpppred或其他具有肽段细胞穿透性预测功能的工具，选留细胞穿透性较好的肽段。
4.根据权利要求1所述的一种dpp-iv抑制肽的鉴定方法，其特征在于：所述步骤s5中对肽段进行毒性预测的工具为https://webs.iiitd.edu.in/raghava/t oxinpred或其他具有肽段毒性预测功能的工具，选留无毒性的多肽。
5.根据权利要求1所述的一种dpp-iv抑制肽的鉴定方法，其特征在于：所述步骤s6中对肽段进行吸收性能、代谢性能预测使用的工具为admet预测工具，所述admet预测工具的网址为http://lmmd.ecust.ed...
【专利技术属性】
技术研发人员：徐斐然，徐宝才，徐国胜，王兆明，蔡克周，周凯，马飞，章宝，
申请(专利权)人：合肥工业大学，
类型：发明
国别省市：
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