一种耐药基因检测方法及系统技术方案

本发明专利技术提供一种耐药基因检测方法，涉及基因检测技术领域。基于多重荧光标记，单管完成复合扩增，通过收集相关耐药基因序列，比对选择基因保守区域，设计特异性扩增引物。本发明专利技术首次实现了在单次检测中，同时检测多个耐药基因的检测。经过筛查之后确定了引物序列及引物加量。复合扩增引物做了减少扩增时间的测试，最终确定了复合扩增的程序。使用片段分析软件分析收集的数据。解决了传统细菌耐药性检测方法虽能提供细菌耐药的表型信息，需要长时间的培养和鉴定，且无法检测耐药基因的问题，突破现有技术的限制，可以在不进行长时间培养和鉴定的情况下，进行检测耐药基因，实现高效快速检测。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及基因检测，具体而言，涉及一种耐药基因检测方法及系统。

技术介绍

1、抗生素的大量使用，导致细菌通过获得基因或染色体突变，使之能够耐受这些药物，从而产生细菌耐药性，使得多种传染病可能没有可行的抗生素治疗，对人类健康造成巨大的风险。细菌耐药性已成为威胁全球公共卫生健康的重要因素之一。2017年世界卫生组织(world health organization，who)发布对人类健康最具威胁的12种“超级细菌”，表明细菌抗生素耐药性已成为全球公共卫生问题。

2、根据我国2014至2019年及2022上半年的细菌耐药性监测报告显示，耐药性大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌为我国临床主要耐药菌。其中除金黄色葡萄球菌外均为革兰氏阴性菌。我国临床分离肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类抗菌药物的耐药率从2005年的3％快速攀升至2019年的25％以上，上升幅度高达8倍。2018年全国细菌耐药监测网(carss)数据显示，全国1429所医院临床分离的肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类抗菌药物的平均耐药率为10.1％，部分省市甚至超过20本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种耐药基因检测方法，其特征在于，包括：

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述按照预设基因序列参数表，将由HPLC纯化后，且纯度至少为95％的引物，组配成5X引物混合物，包括：

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述按照预设比例将缓冲液、化学盐、有机物助剂以及DNA聚合酶混合组成2.5X反应组合物，包括：

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述获取灭活后的菌株浓度为100cfu/mL的混合检测样本，并分别进行10倍、100倍以及1000倍稀释，再通过Buffer AVE试剂洗脱，获得1000cfu/mL，100cfu/mL...

【技术特征摘要】

1.一种耐药基因检测方法，其特征在于，包括：

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述按照预设基因序列参数表，将由hplc纯化后，且纯度至少为95％的引物，组配成5x引物混合物，包括：

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述按照预设比例将缓冲液、化学盐、有机物助剂以及dna聚合酶混合组成2.5x反应组合物，包括：

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述获取灭活后的菌株浓度为100cfu/ml的混合检测样本，并分别进行10倍、100倍以及1000倍稀释，再通过buffer ave试剂洗脱，获得1000cfu/ml，100cfu/ml和10cfu/ml三种浓度混合菌液的样本dna，包括：

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述将所述5x引物混合物、所述2.5x反应组合物以及所述样本dna按预设配置表配置，并按照预设次序循环扩增反应，获得pc...

【专利技术属性】
技术研发人员：车雷，夏军，车力，王宇鹏，
申请(专利权)人：深圳市百迈生命科学有限公司，
类型：发明
国别省市：