一种定量牛外周血中抗原特异性抗体反应的方法及应用技术

本发明专利技术公开了一种定量牛外周血中抗原特异性抗体反应的方法及应用，包括，采集抗原免疫前后牛外周血；利用流式细胞术检测牛外周血中CD21<supgt;+</supgt;IgG<supgt;+</supgt;ER<supgt;+</supgt;B细胞数量和百分比；利用流式细胞术检测牛外周血中CD21<supgt;+</supgt;IgG<supgt;+</supgt;CD27<supgt;+</supgt;B细胞数量和百分比；计算抗原免疫前后牛外周血中CD21<supgt;+</supgt;IgG<supgt;+</supgt;ER<supgt;+</supgt;B细胞和CD21<supgt;+</supgt;IgG<supgt;+</supgt;CD27<supgt;+</supgt;B细胞的数量及百分比的增量；初次接触抗原个体的抗原特异性抗体水平利用CD21<supgt;+</supgt;IgG<supgt;+</supgt;ER<supgt;+</supgt;B细胞数目或百分比的增量来定量，再次接触抗原个体的抗原特异性抗体水平利用CD21<supgt;+</supgt;IgG<supgt;+</supgt;CD27<supgt;+</supgt;B细胞数目或百分比的增量来定量。本发明专利技术可以显著的提高奶牛的综合抗病能力，为培育中国荷斯坦奶牛高免疫力新品系提供实验支撑。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物，具体涉及到一种定量牛外周血中抗原特异性抗体反应的方法及应用。

技术介绍

1、奶牛疾病给奶业造成了巨大的经济损失，抗生素的使用导致了潜在的食品安全和公共健康问题。长期高强度的生产性能选育降低了奶牛抗病性能。一些新型病原体引起的传染性疾病，对奶牛和人类健康构成持续的威胁。疫苗接种是预防各类传染病的有效策略之一，在疫苗研发和应用过程中往往需要对动物血液中抗原特异性抗体进行评价。然而，针对新型疫苗的抗体效价评估只能通过elisa或抗体中和试验进行，这些方法操作繁琐，需要分离血清，对血液样本的量和溶血情况要求较高，并且针对一些非常规抗原仅可对抗体有无进行定性，并不能很好的定量抗体水平，也无法识别疫苗响应较好的个体。

2、除此之外，通过遗传选育手段提高奶牛的疾病抗性是一个重要的策略。近年来人们开始关注健康性状的选择，包括奶中的scc、奶牛的长寿性等，但一直没有筛选出能够反应奶牛综合抗病性的标志(性状)。围绕奶牛综合抗病性有效标志的挖掘及其功能机理的研究，已经成奶业发展中迫切需要解决的关键科学问题。相关结果表明牛的体液免疫应答性状遗传力在本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种定量牛外周血中抗原特异性抗体反应的方法，其特征在于：所述方法为检测牛外周血中三阳性细胞群的细胞数量和百分比，计算抗原免疫后牛外周血中三阳性细胞群细胞数量或百分比的增量进行定量；

2.如权利要求1所述的定量方法在畜禽抗病育种中的应用，其特征在于：包括：

3.如权利要求2所述的应用，其特征在于：所有血样在测定前，需将其进行无菌培养，加入红细胞裂解液室温静置，离心弃上清，重复上述操作至无红细胞为止，用BSA稀释用于B细胞亚群染色的各种抗体，配制合并染料稀释液，在无红细胞的血样中加入合并染料稀释液，室温避光孵育后补加BSA离心弃上清，加入PFA固定液固定细胞后过滤...

【技术特征摘要】

1.一种定量牛外周血中抗原特异性抗体反应的方法，其特征在于：所述方法为检测牛外周血中三阳性细胞群的细胞数量和百分比，计算抗原免疫后牛外周血中三阳性细胞群细胞数量或百分比的增量进行定量；

2.如权利要求1所述的定量方法在畜禽抗病育种中的应用，其特征在于：包括：

3.如权利要求2所述的应用，其特征在于：所有血样在测定前，需将其进行无菌培养，加入红细胞裂解液室温静置，离心弃上清，重复上述操作至无红细胞为止，用bsa稀释用于b细胞亚群染色的各种抗体，配制合并染料稀释液，在无红细胞的血样中加入合并染料稀释液，室温避光孵育后补加bsa离心弃上清，加入pfa固定液固定细胞后过滤。

4.如权利要求3所述的应用，其特征在于：所述加入红细胞裂解液室温静置，红细胞裂解液与奶牛外周血的质量比为3:2，静置时间≥5min。

5.如权利要求2所述的应用，其特征在于：所述分两次对家畜进行肌肉注射模式抗原为采集初始血样当天和第14天对家畜进行肌肉注射模式抗原，其中，当天和第14天注射模式抗原的质量比为1:1。

6.如权利要求2所述的应用，其特征在于：所述采集家畜最终血样时间为第二次注射...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨章平，张志鹏，杨奕，朱立科，商绍彬，卢徐斌，陈坤琳，
申请(专利权)人：扬州大学，
类型：发明
国别省市：