本发明专利技术属于分子生物技术领域，具体公开了一种自体基因表达质粒在真核细胞靶向基因编辑中的应用及靶向基因编辑方法。本发明专利技术通过向宿主细胞中导入自体基因表达质粒，激发宿主细胞的高效DNA重组，提供一种真核细胞靶向基因编辑技术。同时基于自体基因表达质粒，结合同源重组片段，提供了一种既不依赖于蛋白质结构域编程、又不依赖于向导元件编程的可在真核细胞多个靶向基因区域进行基因编辑的方法。与现有技术相比，本发明专利技术提供的真核细胞靶向基因编辑方法更便利、更高效、更加多样化、精准度更高、潜在应用前景更广泛。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及分子生物，具体公开了一种自体基因表达质粒在真核细胞靶向基因编辑中的应用及靶向基因编辑方法。
技术介绍
1、靶向基因编辑技术是一类能够对基因组进行高效率、高精准度定点改写技术的总称。zfn、talen和crispr被誉为基因组编辑的三大利器。这三大利器的共同特征是采用外源核酸酶进行基因组位点的定位，并针对定位点或定位点附近的dna执行定位切割或修饰，从而在定位点引发系列生物学事件，包括激活dna修复系统从而引发基于同源重组的修复、基于非同源末端连接的修复，或者引发碱基编辑(base-editing)或先导编辑(prime-editing)。近十几年来，以crispr为主流的基因编辑技术发展迅速，为生命科学研究及生物技术开发带来了革命性的高效率工具，极大地促进和合成生物学的发展。然而，这些已有的公知的基因编辑技术都需要依靠的外源蛋白质(如cas蛋白)的参与，并且多数情况下需要引发基因组dna的双链断裂、单链断裂、碱基修饰、逆转录酶写入等，从而存在非预期编辑等脱靶隐患，其生物正交性、安全性及精准性仍需要进一步提升。
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【技术保护点】
1.一种自体基因表达质粒在真核细胞靶向基因编辑的应用，其特征在于：所述自体基因表达质粒携带所述靶向基因或所述靶向基因片段的基因表达盒。
2.如权利要求1所述的应用，其特征在于：所述靶向基因编辑包括对所述靶向基因区域中的靶向碱基进行编辑。
3.如权利要求1所述的应用，其特征在于：所述真核细胞包括无RNAi作用机制的真核细胞或存在RNAi作用机制的真核细胞。
4.如权利要求1所述的应用，其特征在于：所述靶向基因片段的长度大于300bp。
5.如权利要求1所述的应用，其特征在于：所述基因表达盒的启动子为强启动子。
6.一种用于真核细胞...
【技术特征摘要】
1.一种自体基因表达质粒在真核细胞靶向基因编辑的应用，其特征在于：所述自体基因表达质粒携带所述靶向基因或所述靶向基因片段的基因表达盒。
2.如权利要求1所述的应用，其特征在于：所述靶向基因编辑包括对所述靶向基因区域中的靶向碱基进行编辑。
3.如权利要求1所述的应用，其特征在于：所述真核细胞包括无rnai作用机制的真核细胞或存在rnai作用机制的真核细胞。
4.如权利要求1所述的应用，其特征在于：所述靶向基因片段的长度大于300bp。
5.如权利要求1所述的应用，其特征在于：所述基因表达盒的启动子为强启动子。
6.一种用于真核细胞靶向基因编辑的自体基因表达质粒组合物，其特征在于：所述自体基因表达质粒组合物包括自体基因表达质粒以及同源重组片段；
7.权利要求6所述的自体基因表达质粒组合物，其特征在于：所述同源重组片段的上同源臂或下同源臂的长度均大于200bp。
8.如权利要求6所述的所述的...
【专利技术属性】
技术研发人员：仪宏，冯惠勇，李天明，
申请(专利权)人：河北科技大学，
类型：发明
国别省市：
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