【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物信息及生物医药，尤其是一种通过抗体吸附构建高通量蛋白捕获界面的方法。
技术介绍
1、酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,elisa)是以酶联免疫反应为基础，将抗原、抗体的特异性识别与酶高效催化作用相结合起来的一种高特异识别检测技术。其基本方法是将已知的抗原或抗体吸附在固相载体(聚苯乙烯微量反应板)表面，使酶标记的抗原-抗体反应在固相表面进行，用洗涤法将液相中的游离成分洗除，从而保证试验结果的特异性与稳定性；最终通过显色反应进行定量测定。通过不同的设计，可以用于检测特定抗原或抗体，通常采用双抗体夹心法检测大分子抗原(如蛋白)。
2、近年来，荧光固相界面在生物传感界面中取得了长足的进步，此类传感体系具有较高的通量和并行分析能力，同时具有较高的通用性，在疾病诊断中应用广泛。与基于显色反应的elisa方法相比，荧光固相传感具有更高的灵敏度，可以满足低丰度靶标的检测需求。目前已有的捕获界面通常是通过化学修饰的方法，将抗体修饰到界面上，此类方法操作复杂，修饰产率不高，并且由于依赖抗体的特定氨基酸基团，因此通用性较差，难以发展成一种构建稳定、通用捕获界面的方法。因此，需要开发一种通过抗体吸附构建高通量蛋白捕获界面的方法。
技术实现思路
1、为了克服现有技术中的缺陷，提供一种通过抗体吸附构建高通量蛋白捕获界面的方法。
2、本专利技术通过下述方案实现：
3、一种通过抗体吸附构建高通量蛋白捕获界面的
4、s1，合成四面体框架核酸结构；
5、s2，将捕获抗体和合成的四面体框架核酸结构混合制备于金岛基底上，构建高通量蛋白捕获界面；
6、s3，将金岛基底置于湿盒中孵育过夜；
7、s4，对捕获界面进行封闭，防止非特异性吸附；
8、s5，孵育蛋白靶标；
9、s6，孵育检测抗体；
10、s7，孵育荧光二抗；
11、s8，纯水洗涤捕获界面，并离心晾干；
12、s9，利用芯片扫描仪对捕获界面进行荧光成像和定量。
13、在所述步骤s1中，合成的四面体框架核酸结构的棱长为17bp，所得即为17bp dtf。
14、通过序列为seq id：1，seq id：2，seq id：3，seq id：4的4条单链dna自组装形成棱长为17bp的四面体框架核酸结构。
15、在所述步骤s2中，所述捕获抗体与17bp dtf的摩尔比为5:1。
16、在所述步骤s3中，所述孵育的湿度为70％。
17、在所述步骤s4中，封闭所用溶液为2％bsa。
18、用2％bsa溶液封闭捕获界面防止非特异性吸附，持续45分钟，清洗捕获界面以去除多余bsa。
19、在所述步骤s5中，所述孵育蛋白靶标用时2.5小时。
20、在所述步骤s6中，所述孵育检测抗体用时1.5小时，所述检测抗体的浓度为50nm。
21、在所述步骤s7中，所述荧光二抗的浓度为20nm，所述孵育荧光二抗用时20分钟。
22、本专利技术的有益效果为：
23、本专利技术一种通过抗体吸附构建高通量蛋白捕获界面的方法具有高度的均一性，可以实现高通量、高灵敏度、高准确性的蛋白捕获和定量检测。
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1.一种通过抗体吸附构建高通量蛋白捕获界面的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种通过抗体吸附构建高通量蛋白捕获界面的方法，其特征在于：在所述步骤S1中，合成的四面体框架核酸结构的棱长为17bp，所得即为17bp DTF。
3.根据权利要求2所述的一种通过抗体吸附构建高通量蛋白捕获界面的方法，其特征在于：通过序列为SEQ ID：1，SEQ ID：2，SEQID：3，SEQ ID：4的4条单链DNA自组装形成棱长为17bp的四面体框架核酸结构。
4.根据权利要求1所述的一种通过抗体吸附构建高通量蛋白捕获界面的方法，其特征在于：在所述步骤S2中，所述捕获抗体与17bp DTF的摩尔比为5:1。
5.根据权利要求1所述的一种通过抗体吸附构建高通量蛋白捕获界面的方法，其特征在于：在所述步骤S3中，所述孵育的湿度为70％。
6.根据权利要求1所述的一种通过抗体吸附构建高通量蛋白捕获界面的方法，其特征在于：在所述步骤S4中，封闭所用溶液为2％BSA。
7.根据权利要求6所述的一种通过抗体吸附
8.根据权利要求1所述的一种通过抗体吸附构建高通量蛋白捕获界面的方法，其特征在于：在所述步骤S5中，所述孵育蛋白靶标用时2.5小时。
9.根据权利要求1所述的一种通过抗体吸附构建高通量蛋白捕获界面的方法，其特征在于：在所述步骤S6中，所述孵育检测抗体用时1.5小时，所述检测抗体的浓度为50nM。
10.根据权利要求1所述的一种通过抗体吸附构建高通量蛋白捕获界面的方法，其特征在于：在所述步骤S7中，所述荧光二抗的浓度为20nM，所述孵育荧光二抗用时20分钟。
...【技术特征摘要】
1.一种通过抗体吸附构建高通量蛋白捕获界面的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种通过抗体吸附构建高通量蛋白捕获界面的方法，其特征在于：在所述步骤s1中，合成的四面体框架核酸结构的棱长为17bp，所得即为17bp dtf。
3.根据权利要求2所述的一种通过抗体吸附构建高通量蛋白捕获界面的方法，其特征在于：通过序列为seq id：1，seq id：2，seqid：3，seq id：4的4条单链dna自组装形成棱长为17bp的四面体框架核酸结构。
4.根据权利要求1所述的一种通过抗体吸附构建高通量蛋白捕获界面的方法，其特征在于：在所述步骤s2中，所述捕获抗体与17bp dtf的摩尔比为5:1。
5.根据权利要求1所述的一种通过抗体吸附构建高通量蛋白捕获界面的方法，其特征在于：在所述步骤s3中，所述孵育的湿度为70％。
【专利技术属性】
技术研发人员：左小磊，樊春海，董柏君，尹芳菲，张舒阳，陶涵洋，薛蔚，
申请(专利权)人：上海交通大学医学院附属仁济医院，
类型：发明
国别省市：
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