【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物活性制品，具体涉及一种南极磷虾钙螯合肽及其制备方法和应用。
技术介绍
1、钙是一种重要的矿物质营养元素，对于形成人体结构和维持正常的生理功能至关重要。钙在人体内的含量约为人体体重的1.5％-2.2％，而其中大部分以磷酸钙的形式存在于骨骼中，这有助于提高骨骼的韧性。在软组织，细胞外液和血液中发现的剩余钙以离子形式存在，与骨钙保持平衡。钙不仅是骨骼生长，血液凝固和维持心脏功能所必需的，而且作为信号转导的第二个信使，在神经冲动传递，肌肉收缩，分泌活动，细胞代谢，免疫反应和酶激活的生理功能中起着至关重要的作用。包括儿童佝偻病和老年人骨质疏松症等在内的一系列代谢性骨病，可能是由于缺乏钙导致的。除此之外，缺钙与骨质疏松症、肾结石、高血压、肥胖症和结肠癌等各种疾病有关。只有膳食中摄入的钙才能为身体的骨骼提供钙量，尽管从骨骼中吸收钙可以维持正常的血清钙水平，但钙的吸收受多种因素干扰，包括食物来源、个体新陈代谢和生理状况等。例如，在摄入富含植酸、草酸和磷酸的膳食后，这些物质在肠道ph条件下会产生不溶性植酸、草酸和磷酸的沉积，从而会降低机体对钙的吸收和利用。
2、随着现代生活质量的稳步提升和大众健康意识的日益增强，补钙已逐渐成为人们追求健康生活的重要一环。因此，补钙产品的选择也逐渐成为了一种保健趋势，市面上的补钙产品品类日益丰富，主要分为四类。第一代补钙制剂以无机钙为主，来源广泛，价格便宜，但是不溶于水，需由胃酸中解离成钙离子才能被人体吸收，会影响正常的消化功能，未被吸收的钙容易沉积在肾脏，增加肾脏的负荷可能导致肾结石
3、目前对钙螯合肽进行纯化存在一定的局限性，时间周期长，处理量较少，不适合工业化生产，制备的组分钙螯合活性不高。因此，亟需提出一种高效靶向制备技术来解决该问题。
技术实现思路
1、本专利技术提供一种南极磷虾钙螯合肽及其制备方法，所制备的产物具有更好的钙螯合活性。
2、本专利技术提供一种南极磷虾多肽及其制备方法，所制备的产物具有更好的钙螯合活性。
3、本专利技术首先提供一种具有钙螯合活性的多肽，所述的多肽是将南极磷虾肉用中性蛋白酶和木瓜蛋白酶进行酶解制备的酶解多肽；
4、作为优选，所述的中性蛋白酶和木瓜蛋白酶的质量比为1:1；
5、所述的酶解，其中在50℃下保温水解4小时；
6、更进一步的，上述的酶解多肽进行了纯化，包括如下的步骤：
7、1)南极磷虾肽的亲和层析
8、使用羟基磷灰石填料对酶解多肽进行亲和层析，用buffer b对酶解多肽进行梯度洗脱，收集洗脱液；所述的buffer b是添加有100mm氯化钠的280mm磷酸盐缓冲液；
9、2)sephadex g-15凝胶过滤层析
10、将羟基磷灰石分离纯化所得的洗脱液组分利用sephadex g-15凝胶柱继续进行分离纯化，用超纯水进行洗脱，流速为0.5ml/min；在220nm波长处进行吸光值的检测，收集出峰时间在55-105min的组分进行反相高效液相色谱层析；
11、3)反相高效液相色谱层析
12、反相高效液相色谱层析，选用c18半制备柱，洗脱的条件为：0-10min，6％乙腈；10-30min，6-30％乙腈；30-40min，30％-6％乙腈，流动相a是超纯水，流动相b是乙腈，流速为1ml/min，柱温为35℃，紫外检测波长为220nm，收集出峰时间12.2-13.0min的洗脱峰为纯化的多肽。
13、更进一步的，所述的纯化的多肽，其氨基酸序列为eedler或iveleee。
14、本专利技术还提供一种钙螯合肽，所述的钙螯合肽是将使用上述的多肽螯合钙离子制备的。
15、更具体的，所述的钙螯合肽是将南极磷虾肽溶液加入到活化好的羟基磷灰石中，于室温下结合，再用磷酸盐缓冲液洗脱除去未结合的南极磷虾肽，然后采用280mm的磷酸盐缓冲液对特异性结合在羟基磷灰石上的南极磷虾钙螯合肽进行洗脱，收集洗脱液，浓缩、透析脱盐、冻干后获得南极磷虾钙螯合肽。
16、本专利技术所提供的南极磷虾钙螯合肽可用于制备补钙制剂。
17、本专利技术所提供的南极磷虾钙螯合肽与钙离子结合形成钙肽螯合物，使钙离子在消化过程中尤其是在肠道中始终保持可溶性的状态，有效地缓解了钙离子在肠道内的沉淀，克服了无机钙刺激性强、吸收利用率低、吸收效果差等缺点。
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1.一种具有钙螯合活性的多肽，其特征在于，所述的多肽是将南极磷虾肉用中性蛋白酶和木瓜蛋白酶进行酶解获得的酶解多肽。
2.如权利要求1所述的多肽，其特征在于，所述的中性蛋白酶和木瓜蛋白酶的质量比为1:1。
3.如权利要求1所述的多肽，其特征在于，所述的酶解是在50℃下保温水解4小时。
4.如权利要求1所述的多肽，其特征在于，所述的酶解多肽进行了纯化，包括如下的步骤：
5.如权利要求1所述的多肽，其特征在于，所述的多肽的氨基酸序列为EEDLER或IVELEEE。
6.权利要求1-5任一项所述的多肽在制备钙螯合肽中的应用。
7.一种钙螯合肽，其特征在于，所述的钙螯合肽是将使用权利要求1-5任一项所述的多肽螯合钙离子制备的。
8.如权利要求7所述的钙螯合肽，其特征在于，所述的钙螯合肽是将权利要求1-5任一项所述的多肽加入到活化好的羟基磷灰石中，于室温下结合，再用磷酸盐缓冲液洗脱除去未结合的南极磷虾肽，然后采用280mM的磷酸盐缓冲液对特异性结合在羟基磷灰石上的南极磷虾钙螯合肽进行洗脱，收集洗脱液，浓缩、透
9.权利要求7所述的钙螯合肽在制备补钙制剂中的应用。
10.一种补钙制剂，其特征在于，所述的补钙制剂中包含有药理有效浓度的权利要求7所述的钙螯合肽。
...【技术特征摘要】
1.一种具有钙螯合活性的多肽，其特征在于，所述的多肽是将南极磷虾肉用中性蛋白酶和木瓜蛋白酶进行酶解获得的酶解多肽。
2.如权利要求1所述的多肽，其特征在于，所述的中性蛋白酶和木瓜蛋白酶的质量比为1:1。
3.如权利要求1所述的多肽，其特征在于，所述的酶解是在50℃下保温水解4小时。
4.如权利要求1所述的多肽，其特征在于，所述的酶解多肽进行了纯化，包括如下的步骤：
5.如权利要求1所述的多肽，其特征在于，所述的多肽的氨基酸序列为eedler或iveleee。
6.权利要求1-5任一项所述的多肽在制备钙螯合肽中的应用。
7.一...
【专利技术属性】
技术研发人员：侯虎，刘扬，樊燕，薛长湖，赵雪，
申请(专利权)人：中国海洋大学，
类型：发明
国别省市：
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