【技术实现步骤摘要】
本申请属于药敏检测，尤其涉及一种基于量子点生物正交标记的细菌药敏快速可视化检测试剂盒及检测方法。
技术介绍
1、药敏试验是使用抗生素前在体外测定细菌对抗生素的敏感程度或耐药水平的试验，它可以揭示抗生素的最低抑菌浓度(mic)，对临床选用高效的抗菌治疗方案至关重要。
2、目前，临床常用的药敏试验检测方法包括肉汤稀释法、纸片扩散法、e-test法和基于微量肉汤稀释法衍生出的仪器检测法。其中，肉汤稀释法、纸片扩散法和e-test法的耗时较长，容易贻误治疗时机；仪器检测方法能够实现快速药敏检测，例如，拉曼光谱法、红外光谱法、受激拉曼光谱法和微流控芯片细菌显微观察法等，可在0.5～5小时内完成药敏检测。
3、但是，现有药敏检测方法在临床应用中存在如下问题：一是拉曼/或红外光谱法的数据分析复杂，便捷性差；二是受激拉曼光谱法和微流控芯片细菌显微观察法具备可视化特性，但依赖昂贵复杂的仪器设备，使用成本高。
技术实现思路
1、本申请公开一种基于量子点生物正交标记的细菌药敏快速可视化检测试剂盒及检测方法，解决了现有药敏试验检测方法存在的耗时长、便捷性差、成本高的技术问题。
2、为了实现上述目的，本申请的第一方面提供了一种基于量子点生物正交标记的细菌药敏快速可视化检测。其中，本申请的细菌药敏快速可视化检测方法包括：
3、制备dbco-peg功能化量子点；
4、分别将梯度浓度的抗菌药物与含有叠氮化代谢标记物的菌液混合共培养后，从各培养组的培养产物
5、分别将各培养组收集的药敏代谢标记菌与所述dbco-peg功能化量子点混合并避光点击化学后，从各反应组的反应产物中分别收集量子点生物正交标记菌；
6、将各反应组收集的量子点生物正交标记菌经紫外光照射后，观察各所述量子点生物正交标记菌组的荧光强度，筛选荧光最强量子点生物正交标记菌组的抗菌药物浓度，与其相邻的高抗菌药物浓度即为mic。
7、在优选的实施方案中，所述dbco-peg功能化量子点的制备方法包括：
8、使氨基水溶性量子点与dbco-peg-nhs在ph＝7.2的pbs缓冲液中进行避光反应后，经30kda超滤管超滤，即得dbco-peg功能化量子点；
9、其中，所述氨基水溶性量子点与所述dbco-peg-nhs的摩尔比为1:500。
10、在优选的实施方案中，所述含有叠氮化代谢标记物的菌液是由1×108cfu/ml的细菌菌液和叠氮化代谢标记物溶液按体积比为1:100混合成；
11、其中，所述叠氮化代谢标记物溶液为50mg/ml的d-ala-n3，或者，25mg/ml的kdo-n3。
12、在优选的实施方案中，所述细菌菌液的培养方法包括：
13、使接种有细菌的lb液体培养基在温度为35±2℃的摇床上孵育8～10小时，得到1×108cfu/ml的细菌菌液。
14、在优选的实施方案中，所述药敏代谢标记菌与所述dbco-peg功能化量子点混合时，dbco-peg功能化量子点与叠氮化代谢标记物的摩尔比为1:20。
15、在优选的实施方案中，所述药敏代谢标记菌与所述dbco-peg功能化量子进行避光点击化学时，反应温度为35±2℃，时间为4小时。
16、在优选的实施方案中，所述细菌包括革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。
17、在优选的实施方案中，所述革兰氏阳性菌包括金黄色葡萄球菌、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、破伤风杆菌。
18、在优选的实施方案中，所述革兰氏阴性菌包括大肠杆菌、绿脓杆菌、变形杆菌、痢疾杆菌、肺炎杆菌。
19、在优选的实施方案中，所述抗菌药物包括青霉素、左氧氟沙星、氨苄西林、四环素、万古霉素、头孢克洛、红霉素、美罗培南、多粘菌素b、庆大霉素、阿奇霉素、环丙沙星。
20、鉴于第一方面所述的基于量子点生物正交标记的细菌药敏快速可视化检测方法，本申请在第二方面提供了一种基于量子点生物正交标记的细菌药敏快速可视化检测试剂盒，其中，所述细菌药敏快速可视化检测试剂盒包括：
21、储存有dbco-peg功能化量子点的a单元，和，储存有叠氮化代谢标记物溶液的b单元；
22、所述b单元包括b1单元和b2单元；
23、所述b1单元内储存有50mg/ml的d-ala-n3；所述b2单元内储存有25mg/ml的kdo-n3。
24、与现有技术相比，本申请实施例的优点或有益效果至少包括：
25、本申请提供的药敏检测方法通过对药敏代谢标记菌点击化学dbco-peg功能化量子点，使得药敏代谢标记菌具备肉眼可见的荧光特性，从而可以基于肉眼可区分的荧光强度差异直接筛选出mic，实现了药敏实验的快速可视化的便捷检测，使药敏检测时间缩短至2～3h，有效避免贻误治疗时机，并且省去了大型昂贵设备的使用，降低了检测成本；同时，可以实现对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的普适性检测，具有快速、便捷、广谱和低成本等优点，临床使用前景良好。
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1.一种基于量子点生物正交标记的细菌药敏快速可视化检测方法，其特征在于，包括：
2.根据权利要求1所述的细菌药敏快速可视化检测方法，其特征在于，所述DBCO-PEG功能化量子点的制备方法包括：
3.根据权利要求1所述的细菌药敏快速可视化检测方法，其特征在于，所述含有叠氮化代谢标记物的菌液是由1×108CFU/mL的细菌菌液和叠氮化代谢标记物溶液按体积比为1:100混合成；
4.根据权利要求3所述的细菌药敏快速可视化检测方法，其特征在于，所述细菌菌液的培养方法包括：
5.根据权利要求1所述的细菌药敏快速可视化检测方法，其特征在于，所述药敏代谢标记菌与所述DBCO-PEG功能化量子点混合时，DBCO-PEG功能化量子点与叠氮化代谢标记物的摩尔比为1:20。
6.根据权利要求5所述的细菌药敏快速可视化检测方法，其特征在于，所述药敏代谢标记菌与所述DBCO-PEG功能化量子进行避光点击化学时，反应温度为35±2℃，时间为4小时。
7.根据权利要求1所述的细菌药敏快速可视化检测方法，其特征在于，所述细菌包括革兰氏阳性菌
8.根据权利要求7所述的细菌药敏快速可视化检测方法，其特征在于，所述革兰氏阳性菌包括金黄色葡萄球菌、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、破伤风杆菌；
9.根据权利要求1～8任一所述的细菌药敏快速可视化检测方法，其特征在于，所述抗菌药物包括青霉素、左氧氟沙星、氨苄西林、四环素、多粘菌素B、万古霉素、头孢克洛、红霉素、美罗培南、庆大霉素、阿奇霉素、环丙沙星。
10.一种基于量子点生物正交标记的细菌药敏快速可视化检测试剂盒，其特征在于，包括储存有DBCO-PEG功能化量子点的A单元，和，储存有叠氮化代谢标记物溶液的B单元；
...【技术特征摘要】
1.一种基于量子点生物正交标记的细菌药敏快速可视化检测方法，其特征在于，包括：
2.根据权利要求1所述的细菌药敏快速可视化检测方法，其特征在于，所述dbco-peg功能化量子点的制备方法包括：
3.根据权利要求1所述的细菌药敏快速可视化检测方法，其特征在于，所述含有叠氮化代谢标记物的菌液是由1×108cfu/ml的细菌菌液和叠氮化代谢标记物溶液按体积比为1:100混合成；
4.根据权利要求3所述的细菌药敏快速可视化检测方法，其特征在于，所述细菌菌液的培养方法包括：
5.根据权利要求1所述的细菌药敏快速可视化检测方法，其特征在于，所述药敏代谢标记菌与所述dbco-peg功能化量子点混合时，dbco-peg功能化量子点与叠氮化代谢标记物的摩尔比为1:20。
6.根据权利要求5所述的细菌药敏快速可视化检测方法，其特征在于，...
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