【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物多糖领域，具体涉及一种银耳纯多糖及其纯化分离方法和应用。
技术介绍
1、银耳作为一种药食同源的真菌，富含多糖、蛋白质、脂肪、维生素和矿物质等多种营养成分，其中多糖是银耳最主要的组成成分，占其干重的60％-70％，具有很高的药用和保健价值，科学研究证明银耳多糖，具有抗氧化、抗肿瘤、抗病毒和调节肠道菌群等多种活性。银耳多糖是酸性杂多糖，已有研究表明其主链为α-(1→3)糖苷键连接的甘露糖，支链由木糖和葡萄糖醛酸组成。目前国内外对银耳多糖的研究大多集中在对粗多糖的提取及其生物活性上，对纯化多糖的结构、降脂降糖活性缺乏深入研究，种种研究表明银耳多糖的活性与其结构之间存在某种联系，因此解析银耳多糖的结构是研究生物活性的前提和依据。
技术实现思路
1、本专利技术主要提供了一种均一的，具有降脂降糖活性的银耳纯多糖，以及该多糖的制备方法：
2、一种银耳纯多糖，具有三股螺旋结构；单糖组成为：甘露糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、半乳糖、木糖、阿拉伯糖、岩藻糖，对应的摩尔比为56.786：0.884：16.707：4.755：12.516：0.550：7.802。
3、进一步的，该多糖为表面光滑的薄片状结构。
4、11、进一步的，该多糖的重均分子量为1.51×106da，数均分子量为8.42×105da，峰位分子量为1.02×106da。
5、一种上述的银耳纯多糖的纯化分离方法，包括以下步骤：
6、a，将银耳冷冻干燥后粉碎，用乙醇水溶
7、b，将银耳粉末加入水中，混匀，超声后，用水充分提取；将得到的提取液离心后收集上清液，上清液浓缩后进行醇沉，离心收集沉淀；将收集到的沉淀置于氯仿和正丁醇体积比4:1的sevage试剂中脱蛋白，重复操作直至无白色蛋白残留，浓缩去除残留的sevage试剂，充分分离并冷冻干燥即得银耳粗多糖；
8、c，将deae sepharose fast flow填料采用湿法装柱，蒸馏水平衡；称取步骤b的粗多糖100mg溶于50ml蒸馏水中，配制成2mg/ml的粗多糖溶液。将粗多糖溶液上样至deaesepharose fast flow阴离子交换层析柱中，用0.2m nacl溶液洗脱，流速设置为1.5ml/min，各浓度每次洗脱50管，用自动收集器收集，每隔5min收集1管，用苯酚-硫酸法检测收集液，置于490nm处测定吸光值，以管数为横坐标和吸光值为纵坐标做洗脱曲线，收集洗脱液，将洗脱液旋转蒸发，充分透析后冷冻干燥。
9、d，在0.25ml/min流速下，以蒸馏水为洗脱液，将步骤c收集好的组分通过葡聚糖凝胶sephadex g-200进行洗脱纯化，完成后合并洗脱液，旋转蒸发后，充分分离并冷冻干燥，获得银耳纯多糖。
10、进一步的，步骤a所述冷冻干燥的温度为-40℃，时间为44h；步骤a所述乙醇水溶液的浓度为80％，提取料液比为1:10。
11、进一步的，步骤b所述提取的银耳粉末与水的料液比为1：
12、(50～80)；提取时间1.5～3h；提取温度70～90℃；超声功率200～280w；离心和醇沉的温度均为4℃。
13、进一步的，步骤b所述浓缩是在50℃下旋转蒸发至原体积的1/4；步骤b所述醇沉是于浓缩后的上清液中加入4倍体积的95％乙醇溶液，4℃下醇沉12h；
14、进一步的，步骤b、步骤c和步骤d所述充分分离并冷冻干燥均是使用流动水透析48h，再在-40℃冷冻干燥44h。
15、本专利技术还提供了上述的银耳纯多糖在降脂降糖食品、药品和保健品中的应用。
16、采用上述方案，本专利技术方法具有以下优点：
17、1、本专利技术的银耳多糖具有一定的抗氧化能力。
18、2、本专利技术的银耳多糖在0-150μg/ml浓度范围内对细胞无明显毒性。
19、3、本专利技术的银耳多糖能可显著降低细胞内tc、ldl-c的含量及脂滴的累积，升高hdl-c的含量，表明该银耳多糖具有显著的降脂活性。
20、4、本专利技术的银耳多糖可以通过激活ampk来降低血脂，，抑制胰岛素信号通路抑制因子socs3的过表达，上调核转录因子pparα的表达，下调固醇调节元件srebp1的表达，改善下游acc、fas的表达，从而调节肝细胞糖脂代谢。
21、5、本专利技术的银耳多糖能够提高细胞对葡萄糖的吸收，在各种酶的作用下促进糖原合成，可通过调节hk、pk的活性加速细胞内葡萄糖的消耗，促进肝糖原的转化，达到调节糖代谢的作用。
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1.一种银耳纯多糖，其特征在于，具有三股螺旋结构；单糖组成为：甘露糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、半乳糖、木糖、阿拉伯糖、岩藻糖，对应的摩尔比为56.786：0.884：16.707：4.755：12.516：0.550：7.802。
2.根据权利要求1所述的银耳纯多糖，其特征在于，为表面光滑的薄片状结构。
3.根据权利要求1所述的银耳纯多糖，其特征在于，重均分子量为1.51×106Da，数均分子量为8.42×105Da，峰位分子量为1.02×106Da。
4.一种权利要求1所述的银耳纯多糖的纯化分离方法，其特征在于，包括以下步骤：
5.根据权利要求4所述的银耳纯多糖的纯化分离方法，其特征在于，步骤a所述冷冻干燥的温度为-40℃，时间为44h；步骤a所述乙醇水溶液的浓度为80％，提取料液比为1:10。
6.根据权利要求4所述的银耳纯多糖的纯化分离方法，其特征在于，步骤b所述提取的银耳粉末与水的料液比为1：(50～80)；提取时间1.5～3h；提取温度70～90℃；超声功率200～280W；离心和醇沉的温度均为4℃。
8.根据权利要求4所述的银耳纯多糖的纯化分离方法，其特征在于，步骤b所述醇沉是于浓缩后的上清液中加入4倍体积的95％乙醇溶液，4℃下醇沉12h。
9.根据权利要求4所述的银耳纯多糖的纯化分离方法，其特征在于，步骤b、步骤c和步骤d所述充分分离并冷冻干燥均是使用流动水透析48h，再在-40℃冷冻干燥44h。
10.一种权利要求1～3任意一项的银耳纯多糖在降脂降糖食品、药品和保健品中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种银耳纯多糖，其特征在于，具有三股螺旋结构；单糖组成为：甘露糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、半乳糖、木糖、阿拉伯糖、岩藻糖，对应的摩尔比为56.786：0.884：16.707：4.755：12.516：0.550：7.802。
2.根据权利要求1所述的银耳纯多糖，其特征在于，为表面光滑的薄片状结构。
3.根据权利要求1所述的银耳纯多糖，其特征在于，重均分子量为1.51×106da，数均分子量为8.42×105da，峰位分子量为1.02×106da。
4.一种权利要求1所述的银耳纯多糖的纯化分离方法，其特征在于，包括以下步骤：
5.根据权利要求4所述的银耳纯多糖的纯化分离方法，其特征在于，步骤a所述冷冻干燥的温度为-40℃，时间为44h；步骤a所述乙醇水溶液的浓度为80％，提取料液比为1:10。
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【专利技术属性】
技术研发人员：宋海昭，路京，张艳辉，沈新春，
申请(专利权)人：南京财经大学，
类型：发明
国别省市：
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