一种检测细胞膜蛋白-配体相互作用的ELISA方法技术

本申请提供了一种检测细胞膜蛋白‑配体相互作用的ELISA方法，包括以下步骤：S1、在细胞培养板中培养细胞；S2、将膜蛋白基因导入细胞，使膜蛋白基因在细胞膜表面表达；S3、弃去细胞培养板中的培养液，设置对照孔和多个样品孔，在对照孔中加入PBS，在多个样品孔中加入不同稀释梯度的带小鼠Fc标签的蛋白溶液，或者加入一定浓度带小鼠Fc标签的蛋白的同时加入不同浓度待测配体溶液，孵育，洗涤；S4、弃去对照孔和多个样品孔中的液体，洗涤；加入稀释的小鼠二抗，孵育，洗涤；S5、在对照孔和多个样品孔中加入混合显色液，孵育；S6、在对照孔和多个样品孔中加入终止液，读取OD值。本申请提供的ELISA方法具有过程简单，时间、经济成本低，特异性强等优点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物领域，更具体地，涉及一种检测细胞膜蛋白-配体相互作用的elisa方法。

技术介绍

1、膜蛋白通常是指细胞膜上的蛋白，约占细胞膜成分的30％，是生物膜功能的主要承担者。膜蛋白约有50多种，包括多种酶、受体、运输蛋白等，赋予了细胞膜的大部分功能，如参与细胞信号转导、物质运输、代谢、分裂、分化等。目前，膜蛋白的检测方法有检测egfp载体表达或抗体免疫荧光标记(if)、免疫印迹法(wb)与酶联免疫吸附技术(elisa)等，前者由于膜蛋白通常都不会只在细胞膜上表达，在细胞内也有大量表达，容易对结果造成干扰。而免疫印迹法主要应用于蛋白定性与半定量，无法准确定量，同时还伴有出现非特异性条带、膜本底差、显色不好等缺点。

2、elisa全称为酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay)，是一种被广泛应用于生物医药、生物化学领域的免疫分析技术，通常用于测量生物样品中的抗体或抗原，包括蛋白质或糖蛋白。类似于其他免疫检测方法，elisa依靠抗体与目标蛋白的结合来完成检测，可用于临床中对病毒感染、食物过敏原、毒本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种检测细胞膜蛋白-配体相互作用的ELISA方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的检测细胞膜蛋白-配体相互作用的ELISA方法，其特征在于，在步骤S1中，所述细胞为贴壁细胞；细胞浓度为1×105个/孔。

3.根据权利要求1所述的检测细胞膜蛋白-配体相互作用的ELISA方法，其特征在于，在步骤S2中，将膜蛋白基因导入所述细胞包括通过病毒感染法或阳离子脂质体法将膜蛋白基因导入所述细胞。

4.根据权利要求1所述的检测细胞膜蛋白-配体相互作用的ELISA方法，其特征在于，在步骤S3中，所述不同稀释梯度为6个不同的带小鼠Fc标签的蛋白溶液...

【技术特征摘要】

1.一种检测细胞膜蛋白-配体相互作用的elisa方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的检测细胞膜蛋白-配体相互作用的elisa方法，其特征在于，在步骤s1中，所述细胞为贴壁细胞；细胞浓度为1×105个/孔。

3.根据权利要求1所述的检测细胞膜蛋白-配体相互作用的elisa方法，其特征在于，在步骤s2中，将膜蛋白基因导入所述细胞包括通过病毒感染法或阳离子脂质体法将膜蛋白基因导入所述细胞。

4.根据权利要求1所述的检测细胞膜蛋白-配体相互作用的elisa方法，其特征在于，在步骤s3中，所述不同稀释梯度为6个不同的带小鼠fc标签的蛋白溶液；孵育的条件为：在37℃下孵育1h；洗涤步骤使用的溶液为1×pbst；洗涤次数为3次。

5.根据权利要求1所述的检测细胞膜蛋白-配体相互作用的elisa方法，其特征在于，在步骤s4中，所述二次抗体带有hrp标签，孵育条件为在37℃下避光孵育30min。

6.根据权利要求1所述的检测细胞膜蛋白-配体...

【专利技术属性】
技术研发人员：成细瑶，黄俊杰，彭源碗，苏正定，
申请(专利权)人：广西大学，
类型：发明
国别省市：