【技术实现步骤摘要】
本专利技术具体涉及一种植物表达载体骨架及应用，属于植物基因工程。
技术介绍
1、植物基因工程是一种利用分子生物学、遗传学技术和基因工程技术来改变植物基因组或在植物中表达外源基因的的方法。植物基因工程能够对植物进行遗传改造，进而培育具有优良性状的新种质资源和品种。植物基因工程步骤包括：基因选择，植物表达载体构建，遗传转化，遗传筛选，繁殖和培育。植物表达载体是开展植物基因工程操作的基本要素，而植物表达载体中所包含的t-dna区段(transfer-dna)可携带外源基因从农杆菌转移并整合到植物基因组，该区段通常包含目标基因表达单元和筛选报告基因表达等表达元件， 在植物的遗传转化过程中发挥非常关键的作用。
2、但是t-dna在整合到拟南芥基因组过程中经常会发生序列缺失（nils k et al,2015 ），而且t-dna lb端的缺失比rb端的缺失更为严重。在实验中，当我们利用lb端携带egfp表达单元的载体进行番茄遗传转化时得到的植株有近50%无法检测到egfp荧光。这暗示egfp表达单元可能被破坏。我们在egfp表达框上设置了1个r引物10个f引物用于pcr检查t-dna lb端的完整性。pcr结果显示在这我们获得的60个转基因植株中，共有27株可能发生了lb端大片段的删除。为了明确这些转基因植株lb端缺失情况，我们等量混合了这27株材料的dna并进行了二代高通量测序，经过分析我们发现了25种lb end缺失类型，最少缺失175bp，最多的缺失达到2285bp，检测到的所有lb end缺失都破坏了lb 3’端的表达元
技术实现思路
1、针对上述现有技术中存在的技术问题，本专利技术一种植物表达载体骨架及其在植物转基因工程中的应用。
2、本专利技术的技术方案如下：
3、一种植物表达载体骨架，包括phn载体骨架、随机序列1（rs1）、随机序列2（rs2）和克隆位点序列；所述克隆位点序列偶联在rs1和rs2之间，其包含至少一个限制性内切酶位点，且该内切酶位点不存在于phn载体骨架中，也不存在于rs1和rs2中。
4、进一步的，所述phn载体骨架是基于pcambia载体骨架进行修改的，pcambia载体骨架中的bsai和/或bsmai限制性内切酶位点被突变或消除。
5、进一步的，所述pcambia载体骨架序列如seq no.1所示，其左边界lb序列为tggcaggatatattgtggtgtaaaca，右边界rb序列为gtaaacctaagagaaaagagcgttta。
6、进一步的，所述克隆位点序列为多克隆位点序列mcs，mcs包含两个及以上的如下所列的常见酶切位点： not i, nco i, kpni, xho i, xba i, pst i, bsa i, pac i, bglii, spe i, sal i, sac i, dpn i, sma i, nhe i, nde i, ecor i, hind iii, ecor v, bamh i,esp3i,ecor v,swai。
7、进一步的，所述随机序列1（rs1）与phn载体骨架的lb序列的3'端偶联，其长度为100bp-2000bp。
8、进一步的，所述rs1中不含有限制性内切酶位点，或含有的限制性内切酶位点与所述克隆位点序列内的限制性内切酶位点不完全重复。
9、进一步的，所述随机序列2（rs2）偶联在克隆位点序列的3'端和phn载体骨架的rb序列的5'端之间，其长度为50-500bp。
10、进一步的，所述rs2中不含有限制性内切酶位点，或含有的限制性内切酶位点与所述克隆位点序列内的限制性内切酶位点不完全重复。
11、上述的植物表达载体骨架在植物转基因工程中的应用。
12、有益效果：本专利技术所构建的植物表达载体骨架，包括phn载体骨架、随机序列1（rs1）、随机序列2（rs2）和多克隆位点（mcs），通过多克隆位点mcs可引入外源基因表达元件，在植物转基因过程中，随机序列rs1和随机序列rs2能够分别在lb端和rb端为外源基因表达元件的表达功能的完整性提供很好的保护，显著提高表达效率。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种植物表达载体骨架，其特征在于，包括pHN载体骨架、随机序列1（rs1）、随机序列2（rs2）和克隆位点序列；所述克隆位点序列偶联在rs1和rs2之间，其包含至少一个限制性内切酶位点，且该内切酶位点不存在于pHN载体骨架中，也不存在于rs1和rs2中。
2.根据权利要求1所述的一种植物表达载体骨架，其特征在于，所述pHN载体骨架是基于pcambia载体骨架进行修改的，pcambia载体骨架中的BsaI和/或BsmaI限制性内切酶位点被突变或消除。
3.根据权利要求2所述的一种植物表达载体骨架，其特征在于，所述pcambia载体骨架序列如SEQ No.1所示。
4.根据权利要求1所述的一种植物表达载体骨架，其特征在于，所述克隆位点序列为多克隆位点序列MCS，MCS包含两个及以上的酶切位点。
5.根据权利要求1所述的一种植物表达载体骨架，其特征在于，所述随机序列1（rs1）与pHN载体骨架的LB序列的3'端偶联，其长度为100bp-2000bp。
6.根据权利要求1所述的一种植物表达载体骨架，其特征在于，所述rs1中不
7.根据权利要求1所述的一种植物表达载体骨架，其特征在于，所述随机序列2（rs2）偶联在克隆位点序列的3'端和pHN载体骨架的RB序列的5'端之间，其长度为50-500bp。
8.根据权利要求1所述的一种植物表达载体骨架，其特征在于，所述rs2中不含有限制性内切酶位点，或含有的限制性内切酶位点与所述克隆位点序列内的限制性内切酶位点不完全重复。
9.如上述权利要求1-8中的任一项所述的植物表达载体骨架在植物转基因工程中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种植物表达载体骨架，其特征在于，包括phn载体骨架、随机序列1（rs1）、随机序列2（rs2）和克隆位点序列；所述克隆位点序列偶联在rs1和rs2之间，其包含至少一个限制性内切酶位点，且该内切酶位点不存在于phn载体骨架中，也不存在于rs1和rs2中。
2.根据权利要求1所述的一种植物表达载体骨架，其特征在于，所述phn载体骨架是基于pcambia载体骨架进行修改的，pcambia载体骨架中的bsai和/或bsmai限制性内切酶位点被突变或消除。
3.根据权利要求2所述的一种植物表达载体骨架，其特征在于，所述pcambia载体骨架序列如seq no.1所示。
4.根据权利要求1所述的一种植物表达载体骨架，其特征在于，所述克隆位点序列为多克隆位点序列mcs，mcs包含两个及以上的酶切位点。
5.根据权利要求1所述的一...
【专利技术属性】
技术研发人员：胡楠，田洪林，李艳华，李道政，张耀龙，王思婷，
申请(专利权)人：安阳起源生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。