枯草芽孢杆菌yoeA基因编码蛋白对plipastatin的外排功能与应用制造技术

本发明专利技术发现一种枯草芽孢杆菌外排泵膜蛋白YoeA，具有将枯草芽孢杆菌抗菌脂肽plipastatin外排至细胞外的功能，降低plipastatin对细胞生长的自抑制作用，促进细胞生长，增加抗菌脂肽plipastatin的产量。通过对plipastatin基因簇上下游进行生物信息学分析，在基因簇上游2767碱基对发现一个假定的编码Na<supgt;+</supgt;驱动转运蛋白yoeA基因，该基因与炭疽芽孢杆菌中的多药及毒性化合物外排蛋白(META)YoeA具有70.84％的同源性。采用增加拷贝数的方式过表达该基因，将plipastatin的产量提高至出发菌株的2.84倍，而利用CRISPR/Cas9技术敲除yoeA基因后，plipastatin产量下降70％；将该基因通过游离质粒回补至敲除yoeA基因的菌株中，plipastatin的产量得以恢复。这一结果证实了YoeA转运蛋白在提升枯草芽孢杆菌plipastatin产量中发挥重要作用，为工业化生产plipastatin提供了技术支持。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物，特别是涉及yoea基因及其工程菌株的构建及其应用，具体而言，本专利技术涉及枯草芽孢杆菌中plipastatin外排泵的鉴定及其在提升plipastatin产量中的应用。

技术介绍

1、plipastatin(也称为fengycin，丰原素)主要是由芽孢杆菌合成的环脂肽类化合物，是由10个氨基酸(l-glu-d-orn-l-tyr-d-thr-l-glu-d-ala-l-pro-l-gln-d-tyr-l-ile，seq id no.5)组成的8元肽环与含有14-19个碳原子的3-羟基脂肪酸相连，该脂肪酸可能是饱和或不饱和的。研究表明，plipastatin对多种土传和采后植物病原真菌，特别是丝状真菌表现出广泛的拮抗作用，如根瘤病(plasmodiophora monoliforme)、串珠镰刀菌(fusarium moniliforme)、禾谷镰刀菌(fusarium graminearum)、葫芦粉病(podosphaerafsca)等。除此之外它还具有抗细菌、抗肿瘤和抗病毒等生物活性。与传统抗菌药物相比，pliplastatin展现本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.yoeA基因，其特征在于，所述yoeA基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.YoeA蛋白，其特征在于，所述YoeA蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

3.权利要求1所述yoeA基因或权利要求2所述YoeA蛋白的生物工程应用，其特征在于，所述应用包括以下(1)至(3)中的至少一种：

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，(1)所述特异性地外排枯草芽孢杆菌中plipastatin：

5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，(2)所述调控枯草芽孢杆菌对plipastatin的敏感性为：>

6.根据权利...

【技术特征摘要】

1.yoea基因，其特征在于，所述yoea基因的核苷酸序列如seq id no.1所示。

2.yoea蛋白，其特征在于，所述yoea蛋白的氨基酸序列如seq id no.2所示。

3.权利要求1所述yoea基因或权利要求2所述yoea蛋白的生物工程应用，其特征在于，所述应用包括以下(1)至(3)中的至少一种：

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，(1)所述特异性地外排枯草芽孢杆菌中plipastatin：

5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，(2)所述调控枯草芽孢杆菌对plipastatin的敏感性为：

【专利技术属性】
技术研发人员：辛志宏，王梦溪，郑杰，殷晨悦，李文庆，
申请(专利权)人：南京农业大学，
类型：发明
国别省市：