一种用于生产制备双降醇4-HBC分枝杆菌的基因工程菌、及其制备方法和应用技术

一种用于生产制备双降醇4‑HBC分枝杆菌的基因工程菌、及其制备方法和应用，属于生物技术和生物化工领域。本发明专利技术是将生成副产物1,4‑HBC菌株中的3‑甾酮‑△<supgt;1</supgt;‑脱氢酶KstD4和KstD5的编码基因敲除或其相关的转录因子TetR2和SrpS的编码基因的过表达，该菌株属于新金色分枝杆菌。本发明专利技术的用于生产制备4‑HBC的基因工程菌株稳定积累产物，并降低了副产物的积累，提高了终产物中4‑HBC的含量，且底物植物甾醇30g/L转化为4‑HBC的产率大于85％。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物技术和生物化工领域，具体涉及一种用于生产制备双降醇4-hbc分枝杆菌的基因工程菌、及其制备方法和应用。

技术介绍

1、甾体类药物是仅次于抗生素的第二大类药物，全球获准上市的甾体药物约有400余种，常用于癌症、重症感染和免疫系统等疾病的治疗。当前甾体工业的起始物料正在由植物提取的薯蓣皂素转变为油脂工业的下脚料植物甾醇，其具有来源广泛、价格低廉等优点。植物甾醇的微生物转化也已成为当前生产各类甾体的主要方式之一，正在逐步取代传统的化学合成路线。

2、分枝杆菌相比其他微生物在利用与代谢异型生物质时表现出明显的天然优势，能够利用胆固醇作为唯一的碳源，具有与甾醇摄取和代谢相关的丰富基因资源。阻断微生物的甾醇分解代谢途径，可获得合成甾体药物的重要前体，如4-雄烯-3,17-二酮(ad)、1,4-雄二烯-3,17-二酮(add)、9-羟基-4-雄烯-3,17-二酮(9-oh-ad)、22-羟基-23,24-双降胆甾-1,4-二烯-3-酮(1,4-hbc)，22-羟基-23,24-双降胆甾-4-烯-3-酮(双降醇，4-hbc)等。

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【技术保护点】

1.一种用于生产制备双降醇4-HBC分枝杆菌的基因工程菌，其特征在于该基因工程菌是将分枝杆菌中的3-甾酮-Δ1-脱氢酶基因的表达量降低、失活或敲除，或者过表达基因簇中相关的转录抑制因子；

2.如权利要求1所述的一种用于生产制备双降醇4-HBC分枝杆菌的基因工程菌，其特征在于所述kstD4的核苷酸序列具体为：如SEQ ID NO.1所示；或编码SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列的序列；或编码与SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列具有至少80％的同源性的氨基酸序列的序列；

3.如权利要求1所述的一种用于生产制备双降醇4-HBC分枝杆菌的基因工程菌，其特征在于该基...

【技术特征摘要】

1.一种用于生产制备双降醇4-hbc分枝杆菌的基因工程菌，其特征在于该基因工程菌是将分枝杆菌中的3-甾酮-δ1-脱氢酶基因的表达量降低、失活或敲除，或者过表达基因簇中相关的转录抑制因子；

2.如权利要求1所述的一种用于生产制备双降醇4-hbc分枝杆菌的基因工程菌，其特征在于所述kstd4的核苷酸序列具体为：如seq id no.1所示；或编码seq id no.2所示的氨基酸序列的序列；或编码与seq id no.2所示的氨基酸序列具有至少80％的同源性的氨基酸序列的序列；

3.如权利要求1所述的一种用于生产制备双降醇4-hbc分枝杆菌的基因工程菌，其特征在于该基因工程菌的出发菌为mycobacterium neoaurum 25795。

4.一种制备权利要求1～3任一项所述的用于生产制备双降醇4-hbc分枝杆菌的基因工程菌的方法，其特征在于以分枝...

【专利技术属性】
技术研发人员：柳志强，王鑫鑫，柯霞，崔家浩，董红朵，郑裕国，
申请(专利权)人：浙江工业大学，
类型：发明
国别省市：