【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物，具体涉及一种检测鳜蛙虹彩病毒和传染性脾肾坏死病毒的试剂盒及其方法和应用。
技术介绍
1、虹彩病毒科(iridoviridae)是正二十面体状、大型细胞质型双链dna病毒，是养殖鱼类中流行性最广、致病力最强的病毒性病原之一。根据国际病毒分类委员会最新的报告(https://ictv.global/taxonomy)，其主要分为α和β两个亚科，7个属共22种，其中，对鳜(siniperca chuatsi)养殖危害严重的两个种分别是鳜蛙虹彩病毒(mandarin fishranavirus，mrv)和传染性脾肾坏死病毒(infectious spleen and kidney necrosisvirus，isknv)。
2、mrv属于α亚科蛙病毒属。蛙病毒是一种宿主范围很广的病毒，可以发生以肾、肝和胃肠道为靶点的全身性感染，病毒通过进食、肠外注射、直接接触或环境暴露传播。急性感染蛙病毒，其发病率和死亡率可达100％，对鱼类、爬行动物和两栖动物具有重要影响，特别是危害养殖鱼类，造成巨大经济损失。mrv于2013年首次被发现并分类，是鳜鱼水产养殖中的一种新兴病原体，导致自然群体的成年鳜鱼群体大量死亡，也有研究表明对杂交鳜鱼幼鱼在感染5天内的致死率达到100％。
3、isknv属于α亚科肿大细胞病毒属，1997年，在广东各养殖地暴发病毒感染引起的鳜鱼病害，在患病鳜脾脏中首次发现一种球形病毒，随后证实了isknv是引起鳜爆发性传染病的致病原，并且以脾肾作为主要靶器官，可造成使鳜脾肾细胞肿大和坏死，
4、目前针对这两种病毒的检测和鉴定，常用巢式pcr、荧光定量pcr、镜检等方式进行，其中巢式pcr需要经过两轮pcr循环，以及最后的电泳检测，花费时间长，而荧光定量pcr则需要昂贵的荧光定量pcr仪，普通光学显微镜镜检只能初步判断病毒感染，确定病毒种类则需要纯化的病毒和电子显微镜的参与。因此，需要开发一种操作简单、对仪器设备要求不高、方便养殖现场操作、可以通过肉眼判断结果的检测方法。
技术实现思路
1、本专利技术第一方面的目的，在于提供一种引物组。
2、本专利技术第二方面的目的，在于提供一种试剂。
3、本专利技术第三方面的目的，在于提供一种试剂盒。
4、本专利技术第四方面的目的，在于提供本专利技术第一方面的引物组、和/或本专利技术第二方面的试剂、和/或本专利技术第三方面的试剂盒的应用。
5、本专利技术第五方面的目的，在于提供一种非诊断目的的鳜蛙虹彩病毒和/或传染性脾肾坏死病毒的检测方法。
6、为了实现本专利技术上述的目的，本专利技术采取的技术方案是：
7、本专利技术的第一个方面，提供一种引物组，包含检测鳜蛙虹彩病毒的引物对和/或检测传染性脾肾坏死病毒的引物对。
8、优选地，所述检测鳜蛙虹彩病毒的引物对包含用于扩增鳜蛙虹彩病毒的正向引物和用于扩增鳜蛙虹彩病毒的反向引物。
9、优选地，所述用于扩增鳜蛙虹彩病毒的正向引物包括核酸序列包括seq id no：5～7中的至少一种。
10、优选地，所述用于扩增鳜蛙虹彩病毒的反向引物包括核酸序列包括seq id no：8～10中的至少一种。
11、优选地，所述用于扩增传染性脾肾坏死病毒的引物对包含用于扩增传染性脾肾坏死病毒的正向引物和用于扩增传染性脾肾坏死病毒的反向引物。
12、优选地，所述用于扩增传染性脾肾坏死病毒的正向引物包括seq id no：11～13中的至少一种。
13、优选地，所述用于扩增传染性脾肾坏死病毒的反向引物包括seq id no：14～16中的至少一种。
14、优选地，所述用于扩增鳜蛙虹彩病毒的引物组核酸序列如seq id no：5、8所示。
15、优选地，所述用于扩增传染性脾肾坏死病毒的引物组核酸序列如seq id no：13、14所示。
16、本专利技术的第二个方面，提供一种试剂，包含本专利技术第一个方面的引物组，以及检测检测鳜蛙虹彩病毒的crrna和/或检测传染性脾肾坏死病毒的crrna。
17、优选地，所述检测鳜蛙虹彩病毒的crrna序列包括seq id no：17～21中的至少一种；
18、优选地，所述检测传染性脾肾坏死病毒的crrna序列包括seq id no：22～25中的至少一种。
19、优选地，所述检测鳜蛙虹彩病毒的crrna序列包括seq id no：18。
20、优选地，所述检测传染性脾肾坏死病毒的crrna序列包括seq id no：23～25中的至少一种；进一步优选地，为seq id no：23。
21、本专利技术的第三个方面，提供一种试剂盒，包括本专利技术第二个方面的试剂。
22、优选地，所述试剂盒还包括荧光探针。
23、优选地，所述荧光探针包括核酸序列，所述核酸序列的5’端标记荧光报告基团，3’端标记淬灭基团；
24、优选地，所述荧光基团包括fam、rox、hex、cy3、cy5中的至少一种；
25、优选地，所述淬灭基团包括bhq1、bhq2、bhq3中的至少一种。
26、优选地，所述试剂盒还包括cas蛋白。
27、优选地，所述cas蛋白为cas12a。
28、优选地，所述试剂盒还包括rpa酶制剂。
29、优选地，所述rpa酶制剂包括重组酶、重组酶负载因子、单链结合蛋白、链置换dna聚合酶。
30、优选地，所述rpa酶制剂还可以包括逆转录酶。
31、优选地，所述试剂盒还包括rpa缓冲液、mg2+、crispr反应缓冲液和depc水。
32、在本专利技术的一些实施例中，所述荧光探针包括：
33、探针1：5’-fam-ttatt-bhq1-3’；
34、探针2：5’-hex-ttatt-bhq1-3’；
35、探针3：5’-cy3-ttatt-bhq2-3’；
36、探针4：5’-rox-ttatt-bhq2-3’；
37、探针5：5’-cy5-ttatt-bhq3-3’。
38、优选地，所述荧光探针为探针1、探针4中的至少一种。
39、本专利技术的第四个方面，提供本专利技术第一个方面的引物组、和/或本专利技术第二个方面的试剂、和/或本专利技术第三个方面的试剂盒在a1)～a3)中任一种中的应用：
40、a1)制备检测鳜蛙虹彩病毒的产品；
41、a2)制备筛选鳜蛙虹彩病毒感染对象的产品中的应用；
42、a3)非诊断目的的检测鳜蛙虹彩病毒；
43、a4)制备检测传染性脾肾坏死病毒的产品；
44、a5)制备筛选传染性脾肾坏死病毒感染对象的产品中的应用；
45、a6)非诊断目的的检测传染性脾肾坏死病毒。
46、优选本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种引物组，其特征在于：包含检测鳜蛙虹彩病毒的引物对和/或检测传染性脾肾坏死病毒的引物对；
2.根据权利要求1所述的引物组，其特征在于：
3.一种试剂，包含权利要求1或2所述的引物组，以及检测检测鳜蛙虹彩病毒的crRNA和/或检测传染性脾肾坏死病毒的crRNA；
4.根据权利要求3所述的试剂，其特征在于：
5.一种试剂盒，其特征在于：包括权利要求3或4所述的试剂。
6.根据权利要求5所述的试剂，其特征在于：所述试剂盒还包括荧光探针；
7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于：
8.权利要求1～2中任一种所述的引物组、和/或权利要求3～4中任一项所述的试剂、和/或权利要求5～7中任一项所述的试剂盒在a1)～a6)中任一种中的应用：
9.一种非诊断目的的鳜蛙虹彩病毒和/或传染性脾肾坏死病毒的检测方法，包括以下步骤：
10.根据权利要求9所述的检测方法，其特征在于：
【技术特征摘要】
1.一种引物组，其特征在于：包含检测鳜蛙虹彩病毒的引物对和/或检测传染性脾肾坏死病毒的引物对；
2.根据权利要求1所述的引物组，其特征在于：
3.一种试剂，包含权利要求1或2所述的引物组，以及检测检测鳜蛙虹彩病毒的crrna和/或检测传染性脾肾坏死病毒的crrna；
4.根据权利要求3所述的试剂，其特征在于：
5.一种试剂盒，其特征在于：包括权利要求3或4所述的试剂。
6.根据权...
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。