蒜芥茄Ve基因的启动子序列及扩增引物和扩增方法技术

本发明专利技术公开了蒜芥茄Ve基因的启动子序列及扩增引物和扩增方法，属于基因克隆技术领域。本发明专利技术提供了一种基于融合引物巢式PCR技术设计得到的扩增蒜芥茄Ve基因的启动子序列的引物组。本发明专利技术利用FPNI‑PCR法进行3轮扩增，成功得到了蒜芥茄SsVe1、SsVe2的启动子序列。基于本发明专利技术所述方法，可快速且顺利得到蒜芥茄SsVe1、SsVe2的启动子序列。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于基因克隆，具体涉及蒜芥茄ve基因的启动子序列及扩增引物和扩增方法。

技术介绍

1、蒜芥茄(拉丁学名：solanumsisymbriifoliumlam.)为茄科、茄属植物。一年生草本，茎叶花序及萼外面均被长柔毛状腺毛及黄色或橘黄色的钻形皮刺，刺长约2～10毫米，基部最宽约1.5毫米，直而针尖，小枝粗壮，枝沿棱角明显。

2、作为野生茄资源，蒜芥茄已被鉴定为茄子黄萎病高抗材料，从其中分离得到了抗黄萎病基因ve1与ve2。进一步分析表明，2个基因均富含亮氨酸重复序列(lrr)结构，属于rlp型抗病蛋白，并且两者在序列上n端一致，c段有一定差异。为了解析ve基因的抗病信号传导机制，需要克隆ve1与ve2的启动子序列，从上游调控方向寻找两者作用机制的差异。

3、传统启动子的克隆多通过常规pcr技术，需要已知的启动子序列，目的材料的基因组测序相对完全，可找到与目的蛋白比对高度一致的5’端上游2000bp的序列作为模板，该方法操作简单，适用研究背景较完全的材料，但不能扩增未知序列的启动子。

4、针对于未知启动子片段的扩增本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种扩增蒜芥茄Ve基因的启动子序列的引物组，其特征在于，包括9条随机简并引物、特异引物FSP1和FSP2；

2.一种扩增蒜芥茄Ve基因的启动子序列的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述引物组。

3.一种利用权利要求1所述引物组或权利要求2所述试剂盒扩增蒜芥茄Ve基因的启动子序列的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)以蒜芥茄DNA为模板，与9条随机简并引物和特异引物Ve1SP1或特异引物Ve2SP1构建第一轮PCR扩增体系，进行第一轮PCR扩增反应，得第一轮PCR扩增产物；所述第一轮PCR扩增反应的程序，包括：1)95℃90s；2)94℃10s，62℃30s...

【技术特征摘要】

1.一种扩增蒜芥茄ve基因的启动子序列的引物组，其特征在于，包括9条随机简并引物、特异引物fsp1和fsp2；

2.一种扩增蒜芥茄ve基因的启动子序列的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述引物组。

3.一种利用权利要求1所述引物组或权利要求2所述试剂盒扩增蒜芥茄ve基因的启动子序列的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)以蒜芥茄dna为模板，与9条随机简并引物和特异引物ve1sp1或特异引物ve2sp1构建第一轮pcr扩增体系，进行第一轮pcr扩增反应，得第一轮pcr扩增产物；所述第一轮pcr扩增反应的程序，包括：1)95℃90s；2)94℃10s，62℃30s，68℃2min，循环2次；3)94℃10s，25℃2min，0.2℃/s；68℃、2min；4)94℃10s，62℃30s，68℃2min；5)94℃10s，62℃30s，68℃2min；6)94℃10s；44℃30s；68℃2min，4)到6)循环5次；75℃5min，4℃保存；

4.根据权利要求3所述方法，其特征在于，步骤(1)所述第一轮pcr扩增体系以25μl计，包括：高保真酶takara ex premier dnapolymerase 12.5μl、9条随机简并引物2μl、ve1sp1或ve2sp1...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴丽艳，程捷，黎志彬，鲍锐，龚亚菊，孙茂，桂敏，胡华冉，钟秋月，
申请(专利权)人：云南省农业科学院园艺作物研究所，
类型：发明
国别省市：