【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及微核实验，尤其涉及一种表皮微核实验药物复合溶剂以及一种表皮细胞微核检测方法。
技术介绍
1、微核试验是检测染色体或有丝分裂器损伤的一种遗传毒性试验方法。无着丝粒的染色体片段或因纺锤体受损而丢失的整个染色体，在细胞分裂后期仍留在子细胞的胞质内成为微核。最常用的是啮齿类动物骨髓嗜多染红细胞(pce)微核试验。以受试物处理啮齿类动物，然后处死，取骨髓，制片、固定、染色，于显微镜下计数pce中的微核，与对照组进行比较，判断受试物是否为哺乳动物体细胞的致突变物。
2、用微核试验来评价药物、放射线、有毒物质等对人体细胞或体外培养细胞遗传学损伤仍是一个直观有效可行的方法，在遗传毒理、医学、食品、药物、环境等诸多方面得到了广泛的应用。微核计数经济、迅速、简便，不需要特殊技能，可以统计更多的细胞并实现计算机自动计数。微核试验技术的种类很多，包括常规微核试验、细胞分裂阻滞微核分析法、荧光原位杂交试验与dna探针与抗着丝粒抗体染色等方法。
3、啮齿动物体内微核实验被广泛应用于检测染色体损伤，主要以造血细胞为靶点。但ich s2指出，对于一些可能不能被全身吸收的皮肤及其他局部用药，以造血细胞为靶点体内遗传毒评价无法得到足够的有用信息，可以考虑在给药接触部分评价遗传毒性。
4、中国专利cn106525699a公开了一种外周血淋巴细胞微核的检测试剂盒及其检测方法，包括：红细胞溶血素、红色荧光染料溶液、裂解液和阳性标准品；所述裂解液包括氯化钠、柠檬酸钠、triton x-114、绿色荧光染料和rnase；并基
5、但是现有技术中仍缺少以表皮细胞为实验材料、能够更加有效准确测试化合物性能的微核实验方法。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种表皮微核实验药物复合溶剂以及一种表皮细胞微核检测方法，能够以表皮细胞为实验材料，有效准确地测试化合物性能。
2、为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
3、本专利技术提供了一种表皮微核实验药物复合溶剂，由以下组分组成：
4、橄榄油、乙醇和丙酮；
5、所述表皮微核实验药物复合溶剂中橄榄油、乙醇和丙酮的体积比为2~4:0.8~1.2:0.8~1.2。
6、优选的，所述表皮微核实验药物复合溶剂中橄榄油、乙醇和丙酮的体积比为3:1:1。
7、本专利技术还提供了一种表皮微核实验给药方法，包括以下步骤：
8、将待测试阳性药物溶解在上述表皮微核实验药物复合溶剂中，得到阳性药物溶液；
9、将实验动物分为对照组和实验组，进行给药：对照组动物表皮涂抹上述表皮微核实验药物复合溶剂，实验组动物表皮涂抹阳性药物溶液。
10、本专利技术还提供了一种表皮细胞微核检测方法，包括以下步骤：
11、s1、将涂抹上述表皮微核实验药物复合溶剂或上述表皮微核实验药物复合溶剂溶解的阳性药物溶液后的表皮组织与edta/pbs溶液混合，浸泡5~15min；
12、s2、将浸泡后的表皮组织与胰蛋白酶混合，消化12h以上；
13、s3、去除表皮组织的真皮层、洗涤后转入mem培养液中，进行震荡分散；
14、s4、震荡分散后用40μm滤膜过滤，得到悬液；
15、s5、将悬液进行离心、重悬和再次离心处理，得到表皮细胞；
16、s6、将表皮细胞与kcl溶液混合，进行低渗处理10~20min，得到充盈为球状的目标细胞；
17、s7、将目标细胞与固定液混合后制备为待观察玻片标本；
18、s8、对待观察玻片标本进行染色及观察，记录表皮细胞微核情况。
19、优选的，所述edta/pbs溶液的终浓度为0.01~0.03%；
20、所述胰蛋白酶的终浓度为0.2~0.2%；
21、所述消化采用的温度为2~5℃。
22、优选的，所述洗涤采用的试剂为pbs；
23、所述mem培养液中含有新生牛血清和双抗；
24、所述mem培养液中新生牛血清的终浓度为8~12%，双抗的终浓度为0.8~1.2%。
25、优选的，所述震荡分散的转速为70~75rpm；
26、所述离心的转速为200~400g，时间为5min；
27、所述kcl溶液的浓度为70~80mm；
28、所述固定液中含有乙酸和乙醇，所述固定液中乙酸和乙醇的体积比为1:2.5~3.5。
29、优选的，所述染色采用的染色剂为姬姆萨或吖啶橙。
30、本专利技术的有益效果：
31、本专利技术将橄榄油、乙醇和丙酮进行复配，组成了一种表皮微核实验药物复合溶剂，本专利技术提供的复合溶剂能够使微核实验中的阳性药物测试结果更加准确，与现有技术中的其他同类药物测试相比，实验组微核发生率更高，并且与对照组能形成明显统计学差异，有利于提升实验动物皮肤表皮基底细胞微核检测方法的可靠性，在化学物质性能评价方面具有重要意义。
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1.一种表皮微核实验药物复合溶剂，其特征在于，由以下组分组成：
2.根据权利要求1所述的表皮微核实验药物复合溶剂，其特征在于，所述表皮微核实验药物复合溶剂中橄榄油、乙醇和丙酮的体积比为3:1:1。
3.一种表皮微核实验给药方法，其特征在于，包括以下步骤：
4.一种表皮细胞微核检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
5.根据权利要求4所述的表皮细胞微核检测方法，其特征在于，所述EDTA/PBS溶液的终浓度为0.01~0.03%；
6.根据权利要求4所述的表皮细胞微核检测方法，其特征在于，所述洗涤采用的试剂为PBS；
7.根据权利要求4所述的表皮细胞微核检测方法，其特征在于，所述震荡分散的转速为70~75rpm；
8.根据权利要求4所述的表皮细胞微核检测方法，其特征在于，所述染色采用的染色剂为姬姆萨或吖啶橙。
【技术特征摘要】
1.一种表皮微核实验药物复合溶剂，其特征在于，由以下组分组成：
2.根据权利要求1所述的表皮微核实验药物复合溶剂，其特征在于，所述表皮微核实验药物复合溶剂中橄榄油、乙醇和丙酮的体积比为3:1:1。
3.一种表皮微核实验给药方法，其特征在于，包括以下步骤：
4.一种表皮细胞微核检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
5.根据权利要求4所述的表皮细胞微核...
【专利技术属性】
技术研发人员：岑小波，杨容，刘斌，安宁晨，张瑶，彭雪梅，
申请(专利权)人：成都华西海圻医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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