通过模拟移动床层析纯化多肽的方法技术

本发明专利技术提供了使用模拟移动床（“ＳＭＢ”）系统将免疫反应性化合物与至少一种非本质成分分离的方法以及用于这些方法的ＳＭＢ装置。还提供了使用ＳＭＢ方法和装置制得的纯化的免疫反应性化合物以及使用纯化的免疫反应性化合物的治疗方法。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
通过模拟移动床层析纯化多肽的方法                     专利
本专利技术涉及使用模拟移动床层析(simulated moving bedchromatography)来纯化多肽的方法以及适于纯化多肽的模拟移动床层析系统和装置。                   专利技术背景和介绍用于蛋白质纯化的层析分离通常以批处理方式(batch mode)来进行，即，使用单个填充柱并随后进行平衡、装载、洗涤、洗脱和再生/净化。该方式导致过程比较长而总产量相当低。此外，由于批处理方式中蛋白质吸收的动力学限制，层析柱只能装载至它们所谓的动态负载量(capacity)，其通常是它们平衡负载量的30至50％。如果该柱子在平衡中运行，这依次需要使用体积是通常所需的2到3倍的柱子。由于蛋白质层析树脂非常昂贵，这具有增加产品纯化成本的主要经济后果。此外，批处理柱层析中的洗涤和洗脱过程需要相当大的流体体积，其也是由于批处理方式操作中，由于使用的纯化水必须是特殊处理的而具有的经济后果。模拟移动床(SMB)层析已经用于石化和矿业中。还发现SMB层析应用于医药工业中来分离对映体。SMB层析的其他应用包括，例如，从果糖-葡萄糖溶液中分离果糖和从甜菜或甘蔗糖浆中分离蔗糖。通过离子交换树脂有差异地吸收溶液成分以致在模拟移动床中显现分离波形。                       专利技术概述本专利技术涉及使用模拟移动床(“SMB”)层析通过与至少一种非本质(immaterial)成分分离来纯化免疫反应性蛋白质的方法、这些方法中可用的SMB系统和装置、通过SMB层析分离的免疫反应性蛋白质和使用分离的免疫反应性蛋白质治疗患者的方法。-->一方面，本专利技术涉及使用模拟移动床层析将在流体混合物中的免疫反应性化合物与至少一种非本质成分分离的方法。根据这个方面，该方法包括步骤：(a)提供模拟移动床装置，其包括流体中进行交流(conducting communication)的多个组件，所述组件包括至少一种固相；(b)将流体混合物连续引入所述模拟移动床装置中，其中流体混合物以逆流方式和所述固相接触；(c)实现免疫反应性化合物与至少一种非本质成分的分离；和(d)收集免疫反应性成分来提供其纯化的成分。根据这方面的一个实施方案，免疫反应性化合物和固相的结合程度比至少一种非本质成分高或低。优选，免疫反应性化合物和固相的结合程度比至少一种非本质成分高。根据另一实施方案，该方法进一步包括通过将促进免疫反应性成分分离的洗脱剂和固相接触来实现所述分离的步骤。合适的洗脱剂包括酸性缓冲剂。合适的固相包括结合蛋白质A或蛋白质G的支持物质。可以使用层析方法如吸附层析、分配层析、离子交换层析、大小排阻层析或亲和层析来实现分离。优选，使用亲和层析实现分离。本专利技术还涉及根据这些方法制得的免疫反应性化合物。另一方面，本专利技术涉及当免疫反应性化合物和至少一种非本质成分两者都存在于流体混合物中时，将免疫反应性化合物与至少一种非本质成分分离的模拟移动床(“SMB”)系统。根据这方面，SMB系统包括多个区域，区域含有逆流地和所述流体混合物接触的固相，其中所述区域包括(i)结合区域，其中免疫反应性化合物和至少一种非本质成分与固相差异结合；(ii)洗涤区域，其中至少一种非本质成分优先与固相分离；和(iii)洗脱区域，其中免疫反应性化合物优先与固相分离。根据一个实施方案，洗涤区域是在结合区域和洗脱区域的中间。固相可以优先和免疫反应性化合物结合。根据该实施方案的一个方面，固相包含用于亲和层析的配体。合适的固相可以包含蛋白质A或蛋白质G。另一合适固相包含阳离子交换树脂。根据该实施方案的一个方面，模拟移动床系统进一步包括洗脱区域和结合区域中间的洗脱洗涤区域。以及，该实施方案可以进一步包括洗脱洗涤区域和结合区域中间的再生区域，以及在再生区域和结合区域中间的平衡区域。本专利技术还涉及包括使用模拟移动床-->系统将免疫反应性化合物与至少一种非本质成分分离的方法，以及使用该模拟移动床系统制得的纯化的免疫反应性化合物。根据另一方面，本专利技术涉及使用模拟移动床层析从抗体和至少一种非本质成分两者都存在的流体混合物中将抗体与至少一种非本质成分分离的方法，其包括步骤(a)提供模拟移动床装置，包括流体中进行交流的多个组件，所述组件包括至少一种固相，其包含优先和抗体结合的亲和层析配体；(b)将流体混合物连续引入所述模拟移动床装置中，其中流体混合物以逆流方式和固相接触；(c)实现抗体与至少一种非本质成分的分离；和(d)收集抗体来提供其纯化的成分。再一方面，本专利技术涉及模拟移动床(“SMB”)系统，用于抗体和至少一种非本质成分两者都存在的流体混合物中将抗体与至少一种非本质成分分离。根据这个方面，SMB系统包括含有固相的多个区域，固相含有亲和树脂，其和流体混合物是逆流地接触，其中所述区域包括(i)结合区域，其中抗体和至少一种非本质成分与固相有差异地结合；(ii)第一洗涤区域，其中至少一种非本质成分优先与固相分离；和(iii)洗脱区域，其中抗体优先与固相分离。另一方面，本专利技术涉及使用模拟移动床层析将流体混合物中的免疫反应性化合物与至少一种非本质成分分离的方法，包括步骤：(a)提供模拟移动床装置，其包括至少一个与所述装置进行交流的流体中的组件，所述组件包括至少一种固相，且其中所述装置包括多个由组件穿过的区域；(b)将流体混合物连续引入结合区域的组件中，其中流体混合物以逆流方式和固相接触，且其中免疫反应性化合物和固相结合；(c)将洗涤缓冲液连续引入洗涤区域中含有结合的免疫反应性化合物的组件中，其中洗涤缓冲液以逆流方式和固相接触，并基本从所述组件移除至少一种非本质成分；(d)将洗脱缓冲液连续引入洗脱区域中含有结合的免疫反应性化合物的组件中，其中洗脱缓冲液以逆流方式和固相接触，并借此将免疫反应性化合物与固相基本分离；和(e)从组件连续地移除含有免疫反应性化合物的产物流。根据一个实施方案，模拟移动床装置包括多个组件。优选，固相包括亲和配体。合适的亲和配体包括蛋-->白质A或蛋白质G。根据一方面，免疫反应性化合物包括抗体或抗体片段。本专利技术还涉及通过这些方法大量制得的纯化的抗体或抗体片段。根据另一方面，本专利技术提供了从至少一种非本质成分纯化免疫反应性化合物的改良方法，改进包括使用了含有蛋白质A或蛋白质G固相的模拟移动床亲和层析。使用本专利技术SMB方法分离的合适免疫反应性化合物包括抗体和抗体片段。这样的免疫反应性化合物包括结合选自CD20、CD40、CD40L、CD23、CD4、CD80和CD86抗原的那些。定义根据本专利技术以及如在此所用的，将以下术语定义成具有以下的意思，除非另外明确地规定：术语“免疫反应性化合物”指的是包括来自免疫球蛋白的抗原结合区域和/或恒定区的化合物。一方面，包括结合抗原的化合物。免疫反应性化合物另外可以包括来自非抗体化合物的肽序列，如细胞因子、细胞因子配体和其他抗原。这样的免疫反应性化合物包括抗体、抗体片段、结构域缺失的抗体，或连接另一特定结合成分的抗体或其混合物。结构域缺失的抗体包括如那些WO02/060995中描述的化合物，其所公开的在此引入作为参考。其他免疫反应性化合物包括融合蛋白，其包括免疫球蛋白链和本文档来自技高网...

【技术保护点】
使用模拟移动床层析从流体混合物中将免疫反应性化合物与至少一种非本质成分分离的方法，包括步骤：（ａ）提供模拟移动床装置，其包括流体中进行交流的多个组件，所述组件包括至少一种固相；（ｂ）将流体混合物连续引入所述模拟移动床装置中，其中流体混合物以逆流方式和固相接触；（ｃ）实现免疫反应性化合物与至少一种非本质成分的分离；和（ｄ）收集免疫反应性化合物来提供其纯化的组分。

【技术特征摘要】
US 2002-9-13 60/410,5061.使用模拟移动床层析从流体混合物中将免疫反应性化合物与至少一种非本质成分分离的方法，包括步骤：(a)提供模拟移动床装置，其包括流体中进行交流的多个组件，所述组件包括至少一种固相；(b)将流体混合物连续引入所述模拟移动床装置中，其中流体混合物以逆流方式和固相接触；(c)实现免疫反应性化合物与至少一种非本质成分的分离；和(d)收集免疫反应性化合物来提供其纯化的组分。2.根据权利要求1的方法，其中所述免疫反应性化合物和固相的结合程度比至少一种非本质成分高或低。3.根据权利要求2的方法，其中所述免疫反应性化合物和固相的结合程度比至少一种非本质成分高。4.根据权利要求3的方法，进一步包括通过将促进免疫反应性化合物分离的洗脱剂和所述固相接触来实现所述分离的步骤。5.根据权利要求4的方法，其中所述固相包括和蛋白质A或蛋白质G结合的支持物材料。6.根据权利要求5的方法，其中所述洗脱剂包括酸性缓冲剂。7.根据权利要求1的方法，其中使用吸附层析、分配层析、离子交换层析、大小排阻层析或亲和层析来实现分离。8.根据权利要求7的方法，其中使用亲和层析实现分离。9.根据权利要求1的方法制备的免疫反应性化合物。10.用于当免疫反应性化合物和至少一种非本质成分两者都存在于流体混合物中时将免疫反应性化合物与至少一种非本质成分分离的模拟移动床(“SMB”)系统，其中SMB系统包括多个含有固相的区域，固相逆流地和所述流体混合物接触，且其中所述区域包括：结合区域，其中免疫反应性化合物和至少一种非本质成分与固相有差异地结合；-->第一洗涤区域，其中至少一种非本质成分优先与固相分离；和洗脱区域，其中免疫反应性化合物优先与固相分离。11.根据权利要求10的模拟移动床系统，其中所述第一洗涤区域是在所述结合区域和所述洗脱区域中间。12.根据权利要求10的模拟移动床系统，其中所述固相优先和所述免疫反应性化合物结合。13.根据权利要求12的模拟移动床系统，其中所述固相包含用于亲和层析的配体。14.根据权利要求13的模拟移动床系统，其中所述固相包含蛋白质A或蛋白质G。15.根据权利要求12的模拟移动床系统，其中所述固相包含阳离子交换树脂。16.根据权利要求10的模拟移动床系统，其进一步包括在所述洗脱区域和所述结合区域之间的洗脱洗涤区域。17.根据权利要求16的模拟移动床系统，其进一步包括在所述洗脱洗涤区域和所述结合区域之间的再生区域。18.根据权利要求17的模拟移动床系统，其进一步包括在所述再生区域和所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：JP特梅斯，AM索南斐尔德，JP皮拉希，L康利，M比绍普斯，M潘宁斯，
申请(专利权)人：拜奥根IDEC公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]