PEG介导的芸薹根肿菌转基因的方法技术

本发明专利技术属于生物技术领域，具体涉及PEG介导的芸薹根肿菌转基因的方法，该方法利用崩溃酶制备芸薹根肿菌根肿菌休眠孢子以得到感受态，通过PEG介导转化根肿菌，转化后直接将根肿菌接种大白菜感病品种根系，并进行水培，在根系中挑取根肿菌单孢接种大白菜幼苗根系，进行单孢分离，并建立转基因群体。本发明专利技术方法具有成本低廉，效果稳定，转化成功率较高的特点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物，具体涉及peg介导的芸薹根肿菌转基因的方法。

技术介绍

1、芸薹根肿菌是十字花科植物根肿病的病原菌，该菌在分类上属于黏菌，其特征介于真菌和原生动物之间，目前尚不能纯培养，为该菌的致病机制研究带来了障碍，在根肿菌遗传转化方面国内外也开展一些工作，2013年feng(genetic tiansformation of theobligate parasite plasmodiophora，phytopatheology，2013,103(10)：1052-1057首次将带有绿色荧光蛋白的载体转入芸薹根肿菌基因组中，初步建立了芸薹根肿菌的遗传转化方法，然而该方法不仅存在转化时间长，而且转化子洪未观察到绿色荧光；目前国内江苏省农业科学院杜艳等建立了一种peg/liac介导的芸薹根肿菌遗传转化方式，主要利用te乙酸锂制备根肿菌感受态细胞，利用peg介导进行遗传转化，利用博来霉素进行阳性转化子筛选后接种寄主，并且充分接种3代获得稳定遗传的转化子，建立了根肿菌转化的方法；杜艳等建立的根肿菌遗传转化体系具有高效稳定的特点，但实际应用中操作效率不高，并未本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种PEG介导的芸薹根肿菌转基因的方法，其特征在于：采用崩溃酶酶解芸薹根肿菌休眠孢子制备原生质体，悬浮于PEG，再用质粒DNA进行转化；

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，利用蔗糖密度梯度法收集具有活性的芸薹根肿菌根肿菌休眠孢子液；

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述原生质体的制备是将崩溃酶酶解芸薹根肿菌休眠孢子制备得到原生质体；

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述转化的方法如下：

5.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述转化的方法操作如下：

6.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述转化的方...

【技术特征摘要】

1.一种peg介导的芸薹根肿菌转基因的方法，其特征在于：采用崩溃酶酶解芸薹根肿菌休眠孢子制备原生质体，悬浮于peg，再用质粒dna进行转化；

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，利用蔗糖密度梯度法收集具有活性的芸薹根肿菌根肿菌休眠孢子液；

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述原生质体的制备是将崩溃酶酶解芸薹根肿菌休眠孢子制备得到原生质体；

4.如权利要求...

【专利技术属性】
技术研发人员：王殿东，毛仲玉，王庆，徐新瑞，廖静静，蔡兆明，罗路云，潘丽梅，
申请(专利权)人：长江师范学院，
类型：发明
国别省市：