【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于动物模型构建，具体涉及了一种dss诱导肠道炎症损伤动物模型的构建、评价方法及应用。
技术介绍
1、肠道作为家禽体内最主要的消化器官和免疫器官，在保障家禽健康和生长发育等方面发挥重要的作用。在集约化和高密度养殖生产条件下，饲料、饮水、环境和疾病等因素均会影响家禽肠道健康，导致养殖成本增加。随着饲料端、养殖端全面禁抗，细菌和病毒感染等诱发的肠道炎症发病率显著增加，养殖面临着成本的提高和疾病风险的进一步加剧。
2、动物模型的构建为疾病的机理研究和治疗药物筛选提供了很好的手段。肉鸭的肠道疾病主要有细菌性、病毒和寄生虫感染等，在进行动物病理学、生物饲料添加剂和疫苗开发等，主要用上述疾病的病原菌或弱毒疫苗等建模。但这种建模方式需要专门的动物隔离区进行试验，且发病程度难以控制，还有可能会引发其他并发症。因此，目前在肉鸭上可见的应用主要集中于使用细菌脂多糖(lps)诱导的肠道炎症。lps诱导因其存在剂量大小和注射次数等差异会造成试验结果重复性差、稳定性低等不足，且lps诱导炎症模型的作用靶点并不直接在肠道，不能作为专门的肠炎模型。
3、由此可见，肉鸭疾病的机理研究和治疗药物筛选研究中亟需一种操作简单、稳定可靠的、可重复性强、模型一致性高的肉鸭肠炎模型构建方法。葡聚糖硫酸钠(dss)是葡聚糖的聚阴离子衍生物，用dss构建小鼠uc模型已广泛用于新药物研发及其发病机制研究。dss不能被肠上皮细胞直接吸收，但可损伤上皮细胞紧密连接和基底膜，导致肠道渗透性增加，促进肠道菌群和抗原渗入，激活免疫系统，诱导炎症反应。ds
技术实现思路
1、为了解决
技术介绍
中存在的问题，本专利技术的目的在于提供一种dss诱导肠道炎症损伤动物模型的构建、评价方法及应用，以解决现有肠道炎症模型未能准确模拟肉鸭慢性肠道炎症损伤的问题。
2、本专利技术所采用的技术方案如下：
3、一、一种dss诱导肠道炎症损伤动物模型的构建方法，包括以下步骤：
4、首先选取肉鸭作为建立dss诱导肠道炎症损伤动物模型的对象，然后将分子量为36～50 kda的葡聚糖硫酸钠dss溶于灭菌饮用水中，配制成重量百分浓度为1.0%的dss溶液，避光保护，现配现用，接着采用两轮dss溶液灌喂法对肉鸭进行灌喂：分别于肉鸭9-13日龄和23-27日龄期间采用配制好的dss溶液对肉鸭进行灌喂处理，在14-22日龄期间停止灌喂dss溶液(即进行恢复处理)，建模期间全程正常饮食，自由饮水， 28日龄的所述肉鸭即为dss诱导肠道炎症损伤动物模型。
5、所述肉鸭为9日龄雄性番鸭。
6、所述dss溶液的重量百分浓度为1.0%~1.2%，灌喂剂量为1~1.2 ml/kg肉鸭体重。
7、二、一种对dss诱导肠道炎症损伤动物模型的评价方法，包括以下步骤：
8、设立对照组，所述对照组为不进行任何dss溶液灌喂，全程正常饮食，自由饮水的28日龄雄性番鸭，将dss诱导肠道炎症损伤动物模型作为建模组，建模组和对照组检测下述指标：
9、1)血清中肠道屏障损伤标志物；
10、2)空肠绒毛损伤情况；
11、3)空肠黏膜屏障功能基因表达水平；
12、4)促炎细胞因子含量及其基因表达水平；
13、5)肠道微生物菌群多样性和菌群组成；
14、利用统计学方法对建模组与对照组的上述指标数据进行差异性分析，并对上述指标设立合格值，若建模组指标数据与对照组相比具备显著性差异，且建模组的上述所有指标均达到合格值，则认为模型构建成功。
15、所述血清中肠道屏障损伤标志物包括血清内毒素lps、d-乳酸和血浆二胺氧化酶dao。
16、所述血清中肠道屏障损伤标志物的检测方法如下：
17、采集建模组和对照组中28日龄肉鸭的血清，采用酶联免疫吸附法分别测定两组肉鸭血清中lps、d-乳酸以及dao的含量，若建模组与对照组的lps、d-乳酸、dao含量相比均具备显著性差异，且建模组中lps、d-乳酸、dao含量均高于对照组，即建模组的血清中肠道屏障损伤标志物指标检测合格。
18、空肠绒毛损伤情况的检测指标包括空肠he染色图、空肠电镜图以及ab-pas染色图。
19、所述空肠绒毛损伤情况的检测方法如下：
20、采集建模组和对照组中28日龄肉鸭的空肠组织，将空肠组织分别经he染色、透射电镜和ab-pas染色，获得两组肉鸭的空肠he染色图、空肠透射电镜图以及空肠ab-pas染色图，利用空肠he染色图、空肠透射电镜图和空肠ab-pas染色图获取肉鸭空肠绒毛损伤情况；若相比于对照组，建模组肉鸭的绒毛、微绒毛损伤更严重，紧密连接蛋白结构不完整，且杯状细胞数量显著降低，即建模组的空肠绒毛损伤情况指标检测合格。
21、所述的空肠黏膜屏障功能基因包括黏蛋白基因 muc-2和紧密连接蛋白基因 claudin-1、 occludin和 zo-1；所述空肠黏膜屏障功能基因表达水平的检测方法如下：
22、采用实时荧光定量pcr法分别测得空肠黏膜屏障功能基因的扩增的ct值(循环阈值)，并以内参基因 β-actin的ct值进行标准化校正，得到空肠黏膜屏障功能基因表达水平；若建模组与对照组的 muc-2、 claudin-1、 occludin和 zo-1基因表达量相比具备显著性差异，且建模组中 muc-2、 claudin-1、 occludin和 zo-1基因表达量均低于对照组，即建模组的空肠黏膜屏障功能基因表达水平指标检测合格。
23、所述的促炎细胞因子包括il-2、il-6和tnf-α；所述促炎细胞因子基因表达量的检测方法如下：
24、采用实时荧光定量pcr法测得促炎细胞因子的扩增的ct值，并以内参基因 β-actin的ct值进行标准化校正，得到促炎细胞因子基因表达量；若建模组与对照组的 il-2、 il-6和 本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种DSS诱导肠道炎症损伤动物模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种DSS诱导肠道炎症损伤动物模型的构建方法，其特征在于：所述肉鸭为9日龄雄性番鸭。
3.根据权利要求1所述的一种DSS诱导肠道炎症损伤动物模型的构建方法，其特征在于：所述DSS溶液的重量百分浓度为1.0%~1.2%，灌喂剂量为1~1.2 mL/kg肉鸭体重。
4.一种对权利要求1-3任一所述方法构建的DSS诱导肠道炎症损伤动物模型的评价方法，其特征在于，包括以下步骤：
5.根据权利要求4所述的一种DSS诱导肠道炎症损伤动物模型的评价方法，其特征在于：所述血清中肠道屏障损伤标志物包括血清内毒素LPS、D-乳酸和血浆二胺氧化酶DAO；所述血清中肠道屏障损伤标志物的检测方法如下：
6.根据权利要求4所述的一种DSS诱导肠道炎症损伤动物模型的评价方法，其特征在于：所述空肠绒毛损伤情况的检测方法如下：
7.根据权利要求4所述的一种DSS诱导肠道炎症损伤动物模型的评价方法，其特征在于：所述的空肠黏膜屏障功能基因包括黏蛋
8.根据权利要求4所述的一种DSS诱导肠道炎症损伤动物模型的评价方法，其特征在于：所述的促炎细胞因子包括IL-2、IL-6和TNF-α；所述促炎细胞因子基因表达量的检测方法如下：
9.根据权利要求4所述的一种DSS诱导肠道炎症损伤动物模型的评价方法，其特征在于：所述肠道微生物菌群多样性和菌群组成的检测方法如下：
10.一种如权利要求1-3任一所述方法构建的DSS诱导肠道炎症损伤动物模型在动物肠道屏障受损引起的肠道炎症的药物筛选中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种dss诱导肠道炎症损伤动物模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种dss诱导肠道炎症损伤动物模型的构建方法，其特征在于：所述肉鸭为9日龄雄性番鸭。
3.根据权利要求1所述的一种dss诱导肠道炎症损伤动物模型的构建方法，其特征在于：所述dss溶液的重量百分浓度为1.0%~1.2%，灌喂剂量为1~1.2 ml/kg肉鸭体重。
4.一种对权利要求1-3任一所述方法构建的dss诱导肠道炎症损伤动物模型的评价方法，其特征在于，包括以下步骤：
5.根据权利要求4所述的一种dss诱导肠道炎症损伤动物模型的评价方法，其特征在于：所述血清中肠道屏障损伤标志物包括血清内毒素lps、d-乳酸和血浆二胺氧化酶dao；所述血清中肠道屏障损伤标志物的检测方法如下：
6.根据权利要求4所述的一种dss诱导肠道炎症损伤动物模...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘兵，罗鑫宇，余东游，葛超悦，邹晨浩，赵陆原，
申请(专利权)人：新昌县天姥实验室，
类型：发明
国别省市：
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