一种Easy Way通用载体系统、试剂盒及其应用技术方案

本发明专利技术公开了一种Easy Way通用载体系统、试剂盒及其应用，涉及基因工程技术领域，所述Easy Way通用载体系统包括载体骨架和连接在载体骨架上的LMR1序列，所述LMR1序列包括依次连接的上游同源臂LFRS、多克隆位点MCS和下游同源臂RFRS；所述载体骨架上不含有与多克隆位点MCS相同的酶切位点。本发明专利技术利用Easy Way通用载体系统进行目的基因片段的重组载体构建时，仅需对目的基因进行一次引物设计便可通过一对相同的酶切位点将PCR扩增产物构建至EasyWay载体系统的任意载体骨架中，简单、省时、省力、省钱。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及基因工程，具体涉及一种easy way通用载体系统、试剂盒及其应用。

技术介绍

1、载体作为基因工程的三大工具之一，在生产实践和科学研究中占据着非常重要的地位，酶切连接和酶切线性化的同源重组是最常被使用的载体构建方法，然而目前的载体系统存在很多缺陷导致不同实验室间和同一实验室内的载体互不兼容，载体构建时费时、费力且出错率高。

2、现有不同载体多克隆位点(mcs)上的酶切位点类别和排列顺序都不相同，不同载体多克隆位点(mcs)及两端同源臂dna序列也不同，如果一个基因需要构建到不同的载体上时，便需要针对不同载体的酶切位点和同源臂序列设计不同的扩增引物，从而导致设计引物时需要进行多次测序确认，费时费力且增加了出错概率。

3、而且部分载体的多克隆位点(mcs)含有非6bp碱基的酶切位点，因此整合入目的基因片段时易存在移码风险，设计引物时易因该风险的处理不当导致实验失败。

4、并且多数载体骨架序列上存在与多克隆位点(mcs)中相同的酶切位点，这很大程度上限制了对酶切位点的选择，因此使用这些载体会较大程度地增加了载体本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种Easy Way通用载体系统，其特征在于，包括载体骨架和连接在载体骨架上的LMR1序列，所述LMR1序列包括依次连接的上游同源臂LFRS、多克隆位点MCS和下游同源臂RFRS；

2.根据权利要求1所述的一种Easy Way通用载体系统，其特征在于，所述多克隆位点MCS由BamH I、Spe I、EcoR I、Sac I、EcoRV、Xba I、Sma I/Xma I、HindⅢ、Sal I、Xho I酶切位点组成。

3.根据权利要求2所述的一种Easy Way通用载体系统，其特征在于，所述LMR1序列的上游设有N端插入序列，所述LMR1序列的下游设有C端插...

【技术特征摘要】

1.一种easy way通用载体系统，其特征在于，包括载体骨架和连接在载体骨架上的lmr1序列，所述lmr1序列包括依次连接的上游同源臂lfrs、多克隆位点mcs和下游同源臂rfrs；

2.根据权利要求1所述的一种easy way通用载体系统，其特征在于，所述多克隆位点mcs由bamh i、spe i、ecor i、sac i、ecorv、xba i、sma i/xma i、hindⅲ、sal i、xho i酶切位点组成。

3.根据权利要求2所述的一种easy way通用载体系统，其特征在于，所述lmr1序列的上游设有n端插入序列，所述lmr1序列的下游设有c端插入序列，lmr1及其上下游的n、c端插入序列组成lmr2序列，n、c端插入序列均不含有与多克隆位点mcs相同的酶切位点。

4.根据权利要求3所述的一种easy way通用载体系统，其特征在于，所述n端插入序列包括bglii和psti酶切位点序列，或通过bglii和psti酶切位点插入的启动子序列或c端标签序列，所述c端插入序列包括kpni酶切位点序列，或通过kpni酶切位点插入的n端标签序列...

【专利技术属性】
技术研发人员：姜鹏飞，杨云飞，郑撼，党雪阳，刘君，时点石，李云飞，江海洋，
申请(专利权)人：安徽农业大学，
类型：发明
国别省市：