一种脂肪类器官血管化的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种脂肪类器官血管化的制备方法，包括以下步骤：人源脂肪干细胞使用悬滴法进行类器官的培养，脂肪类器官血管化的诱导，血管化脂肪类器官成脂诱导及最终的维持培养等。本发明专利技术制备方法步骤简单，类器官培养的成功率均在95％以上，同时成本较市场其它公司的培养基成本降低60％以上。血管化脂肪类器官体外研究模型的建立，相对于细胞系模型功能单一、动物模型成本高，周期长的特点，更加具有应用价值，为脂肪发育及其代谢机制的研究提供了可靠的研究手段。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物，具体涉及一种脂肪类器官血管化的制备方法。

技术介绍

1、肥胖症是一组常见的代谢症群。肥胖症的糖、脂代谢进食过多的热量促进甘油三酯的合成和分解代谢，肥胖症的脂代谢表现得更加活跃，相对糖代谢受到抑制，这种代谢改变参与胰岛素抵抗的形成，由肥胖及其引发的糖尿病，脂肪肝，高血脂症等疾病已成为威胁人类健康的世界性问题。研究脂肪发育及其代谢机制对于研发减脂药物，抑制肥胖具有重要意义。

2、脂肪组织，是一种储备中性脂肪的疏松结缔组织。细胞中聚集大量脂肪,以致核和细胞器都被挤到细胞一侧。皮下，特别是肥胖动物的皮下、肠系膜上都富有脂肪组织。脂肪组织中网状纤维很发达。

3、大多数哺乳动物拥有两种脂肪组织：白色脂肪组织(white adipose tissue，wat)和棕色脂肪组织(brown adipose tissue，bat)。白色脂肪细胞主要通过合成甘油三脂储存机体代谢过剩的能量，而棕色脂肪细胞中富含线粒体，能通过消耗脂肪酸中的能量产热。2024年4月，一项发表于《自然·代谢》(nature metabolism)的研究表明，本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种脂肪类器官血管化的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种脂肪类器官血管化的制备方法，其特征在于，所述步骤一悬滴法进行脂肪干细胞类器官的培养是将培养扩增后的脂肪干细胞胰酶消化后，干细胞完全培养基终止消化，取300g，离心5min去上清，采用悬滴法使脂肪干细胞形成三维脂肪干细胞球，悬滴培养2-3天，后用脂肪类器官维持培养基DM培养备用，每个细胞球含有的细胞数为8000-10000，其中悬滴法是用脂肪类器官诱导分化培养基DM制备细胞悬液，细胞悬液细胞浓度在4×105-5×105/ml，以20μL单细胞悬液接种于细胞培养皿顶盖内侧，制备悬滴，在细菌...

【技术特征摘要】

1.一种脂肪类器官血管化的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种脂肪类器官血管化的制备方法，其特征在于，所述步骤一悬滴法进行脂肪干细胞类器官的培养是将培养扩增后的脂肪干细胞胰酶消化后，干细胞完全培养基终止消化，取300g，离心5min去上清，采用悬滴法使脂肪干细胞形成三维脂肪干细胞球，悬滴培养2-3天，后用脂肪类器官维持培养基dm培养备用，每个细胞球含有的细胞数为8000-10000，其中悬滴法是用脂肪类器官诱导分化培养基dm制备细胞悬液，细胞悬液细胞浓度在4×105-5×105/ml，以20μl单细胞悬液接种于细胞培养皿顶盖内侧，制备悬滴，在细菌或细胞培养板的底部加入无菌水，以维持湿度。

3.根据权利要求1所述的一种脂肪类器官血管化的制备方法，其特征在于，所述步骤二脂肪类器官血管化诱导是将已形成细胞球的脂肪干细胞用1ml枪头转移至含有500μl脂肪干细胞血管化诱导培养基的24孔超低吸附板中，每孔3-4个细胞球，将超低吸附板置于37℃，5％co2条件下2天，诱导脂肪干细胞向血管内皮细胞定向，使用脂肪干细胞血管化诱导培养基在超低吸附板中悬浮培养诱导脂肪干细胞2天，诱导脂肪干细胞向血管内皮细胞定向，使用paraflim封口膜和384孔pcr板构建多孔模具，将脂肪干细胞血管化诱导培养基培养两天的脂肪干细胞球转移至模具内，模具中每孔放置一个脂肪干细胞球，采用8～12mg/ml浓度基质胶包埋细胞...

【专利技术属性】
技术研发人员：宫晓艳，王大鹏，李志刚，郭志英，张雪晨，
申请(专利权)人：北京翱根生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：