【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及层析领域，具体涉及一种含巯基/二硫键的蛋白偶联固相基质的方法。
技术介绍
1、以蛋白作为配基的层析介质是一类广泛使用的层析介质，如蛋白a-抗体亲和层析，抗体-抗原免疫层析等。将蛋白偶联至层析基质一般需要温和的条件，以避免蛋白失活，数十年来，已有十余类偶联技术成熟地应用于各类蛋白偶联。蛋白偶联至层析介质的一般步骤是先通过活化试剂在层析基质上引入可与蛋白上氨基、羧基、巯基等反应的活性基团，形成预活化的层析基质，再加入蛋白溶液，在合适的条件下通过蛋白上基团与基质上活性基团反应进行偶联，最后使用封闭剂封闭基质上剩余的活性基团。根据蛋白偶联位点的不同，这些偶联方法可简单分类为巯基偶联、氨基偶联、羧基偶联等，巯基偶联常用的活性基团包括环氧基、马来酰亚胺基、甲苯磺酰基等，氨基偶联常用的活性基团包括环氧基、醛基、羧基、n-羟基琥珀酰亚胺基、甲苯磺酰基等，羧基偶联常用的活性基团包括氨基等。然而，使用上述方法将蛋白偶联至层析基质上获得的层析介质，容易出现反压上升、非特异性吸附和耐碱性下降。
技术实现思路p>
1、因此，本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种含巯基/二硫键的蛋白偶联固相基质的方法，其特征在于，含巯基/二硫键的待偶联蛋白在偶联前或偶联后，包括采用烷基化试剂对所述含巯基/二硫键的待偶联蛋白上的巯基/二硫键进行烷基化。
2.根据权利要求1所述的含巯基/二硫键的蛋白偶联固相基质的方法，其特征在于，所述烷基化试剂包括卤代乙酰胺、碘乙酸、N-乙基马来酰亚胺或含有所述烷基化试剂的物质中的至少一种。
3.根据权利要求2所述的含巯基/二硫键的蛋白偶联固相基质的方法，其特征在于，所述烷基化试剂为卤代乙酰胺；可选的，为氯乙酰胺或碘乙酰胺。
4.根据权利要求1-3任一项所述的含巯基/二...
【技术特征摘要】
1.一种含巯基/二硫键的蛋白偶联固相基质的方法，其特征在于，含巯基/二硫键的待偶联蛋白在偶联前或偶联后，包括采用烷基化试剂对所述含巯基/二硫键的待偶联蛋白上的巯基/二硫键进行烷基化。
2.根据权利要求1所述的含巯基/二硫键的蛋白偶联固相基质的方法，其特征在于，所述烷基化试剂包括卤代乙酰胺、碘乙酸、n-乙基马来酰亚胺或含有所述烷基化试剂的物质中的至少一种。
3.根据权利要求2所述的含巯基/二硫键的蛋白偶联固相基质的方法，其特征在于，所述烷基化试剂为卤代乙酰胺；可选的，为氯乙酰胺或碘乙酰胺。
4.根据权利要求1-3任一项所述的含巯基/二硫键的蛋白偶联固相基质的方法，其特征在于，所述烷基化试剂的添加量为所述待偶联蛋白中的巯基/二硫键含量的0.1-10倍摩尔量。
5.根据权利要求1-4任一项所述的含巯基/二硫键的蛋白偶联固相基质的方法，其特征在于，在所述烷基化步骤中，还包括添加二硫键还原剂；
6.根据权利要求5所述的含巯基/二硫键的蛋白偶联固相基质的方法，其特征在于...
【专利技术属性】
技术研发人员：李延军，刘龙，张建涛，李晨辉，寇晓康，
申请(专利权)人：西安蓝晓科技新材料股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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