毕赤酵母启动子的强度提升改造方法及其在蛋白表达中的应用技术

本发明专利技术提供了一种毕赤酵母启动子的强度提升改造方法及其在蛋白表达中的应用。基于毕赤酵母基因组序列的分析，建立了一种启动子改造的方法，即对启动子中的碱基类别进行定向替换，可以实现对毕赤酵母启动子表达强度的提升。利用本发明专利技术的方法进行毕赤酵母启动子优化改造，设计及操作简单，容易获得强度提升的启动子，可实现诱导型及组成型启动子表达强度的提升。将以上启动子应用于多种蛋白质表达中，有效提升其表达量，具有应用价值。本发明专利技术也提供了该方法生成的启动子变体，可应用于蛋白质生产的研究。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物工程领域，更具体地，本专利技术涉及一种毕赤酵母启动子的强度提升改造方法及其在蛋白表达中的应用。

技术介绍

1、毕赤酵母是一种用于外源蛋白生产的常用宿主，具有非常强力的转录调控系统，且在遗传操作、翻译后修饰、分泌表达、高密度培养及产物回收纯化等方面展现了诸多优势。在外源蛋白的生产及途径构建中，灵活可控的基因表达至关重要，其中，诱导型启动子可以解耦细胞生长和产物合成阶段，精准控制蛋白的表达时机和水平。aox1启动子是毕赤酵母中广泛使用的一种诱导型启动子，其受甲醇强力诱导，同时被葡萄糖、甲醇、甘油等多种常用碳源严格阻遏。因其严格诱导的特性，适用于对目的基因的灵活调控。

2、aox1启动子的启动强度已较为可观，但仍有进一步的提升空间，传统的启动子改造手段通过对其关键转录因子结合位点或tata box等区域进行片段插入、删除等操作进行启动子强度改造，这种方式需要对启动子区域进行精细的分析及功能研究，实验设计繁琐，工作量大，且其改造方式难以应用于其他启动子，找到进一步功能提升的启动子存在难度。

3、基于以上背景，毕赤酵母启动子本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种对毕赤酵母工程菌的启动子进行改造的方法，所述方法提升启动子强度，包括：

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述毕赤酵母包括：Komagataella属或Pichia属酵母；较佳地，所述毕赤酵母包括：Komagataella phaffiiNRRL-Y 11430或其衍生株，Komagataella phaffii GS115菌株或其衍生株。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述启动子包括：AOX1启动子，GAP启动子，PCK1启动子；较佳地，与改造前的启动子相比，经改造的启动子的表达强度显著性提高，例如提高5％以上、10％以上、15％以上...

【技术特征摘要】

1.一种对毕赤酵母工程菌的启动子进行改造的方法，所述方法提升启动子强度，包括：

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述毕赤酵母包括：komagataella属或pichia属酵母；较佳地，所述毕赤酵母包括：komagataella phaffiinrrl-y 11430或其衍生株，komagataella phaffii gs115菌株或其衍生株。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述启动子包括：aox1启动子，gap启动子，pck1启动子；较佳地，与改造前的启动子相比，经改造的启动子的表达强度显著性提高，例如提高5％以上、10％以上、15％以上、20％以上、30％以上、40％以上、50％以上或更高。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述aox1启动子的核心启动子具有seq idno:10所示的核苷酸序列；较佳地，所述经改造的aox1启动子的核苷酸序列如seq id no:4或seq id no:5所示；

5.一种经改造的启动子，所述启动子具有提升的强度，其核心启动子中包括3...

【专利技术属性】
技术研发人员：蔡孟浩，要超颖，
申请(专利权)人：华东理工大学，
类型：发明
国别省市：