一种暖地杓兰DNA条形码及其在物种鉴定中的应用制造技术

本申请是关于一种暖地杓兰DNA条形码及其在物种鉴定中的应用。该应用的步骤包括：提取待测样品总DNA后，对总DNA进行打断，获得DNA片段；对DNA片段进行末端修复和接头连接后进行PCR扩增，得到测序文库；对测序文库进行测序，提取ITS核苷酸序列；将ITS核苷酸序列与暖地杓兰DNA条形码进行序列特征比对。本申请提供的方案，能够对暖地杓兰进行快速、准确鉴定，为暖地杓兰及杓兰属物种的准确鉴定提供理论依据和技术支撑。

【技术实现步骤摘要】

本申请涉及分子鉴定，尤其涉及一种暖地杓兰dna条形码及其在物种鉴定中的应用。

技术介绍

1、暖地杓兰（ cypripedium subtropicum），隶属于兰科（orchidaceae）杓兰属（ cypripedium），植株高达1.5米，具根状茎和肉质根，茎直立，被短柔毛，基部具数枚鞘，中部以上具9-10枚叶。叶片椭圆状长圆形至椭圆状披针形，先端渐尖，上面无毛，背面被短柔毛，边缘多少具缘毛，基部收狭成柄。花序顶生，总状，具7花，花黄色，唇瓣上有紫色斑点，唇瓣深囊状，倒卵状椭圆形，极具观赏价值。

2、暖地杓兰是亚洲分布唯一的亚热带种，国内主要分布于西藏和云南，野外居群活植株仅存不足300株。近年来，人为干扰大，以及气候变化激烈，导致生物多样性丧失，随时面临灭绝的风险，急需开展行之有效的拯救保护工作。目前暖地杓兰已列为《国家重点保护野生植物名录》（2021版），保护等级为ι级，iucn等级为濒危，列入cites附录ⅱ、中国高等植物受威胁物种名录、云南省极小种群野生植本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种基于DNA条形码的暖地杓兰鉴定方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的暖地杓兰鉴定方法，其特征在于，所述步骤2）中PCR扩增条件为：98℃变性30s，1个循环；98℃变性10s，65℃延伸75s，进行30个循环；65℃后延伸5s；4℃保持。

3.根据权利要求1所述的暖地杓兰鉴定方法，其特征在于，所述步骤2）中接头连接条件为：温度33℃，时间25min，离心力8000rcf。

4.根据权利要求1所述的暖地杓兰鉴定方法，其特征在于，所述步骤1）中采用超声波对总DNA进行打断。

5.根据权利要求1所述的暖地杓兰鉴定方法，...

【技术特征摘要】

1.一种基于dna条形码的暖地杓兰鉴定方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的暖地杓兰鉴定方法，其特征在于，所述步骤2）中pcr扩增条件为：98℃变性30s，1个循环；98℃变性10s，65℃延伸75s，进行30个循环；65℃后延伸5s；4℃保持。

3.根据权利要求1所述的暖地杓兰鉴定方法，其特征在于，所述步骤2）中接头连接条件为：温度33℃，时间...

【专利技术属性】
技术研发人员：李村富，杨俊波，何俊，
申请(专利权)人：中国科学院昆明植物研究所，
类型：发明
国别省市：