一种构巢曲霉异源表达系统及其构建方法与应用技术方案

技术编号:42561805 阅读:60 留言:0更新日期:2024-08-29 00:31
本发明专利技术涉及一种构巢曲霉异源表达系统及其构建方法与应用,敲除构巢曲霉基因组中的α‑1,3‑葡聚糖合成基因agsB,并敲除GAG合成基因中的任意一个或多个,构建得到构巢曲霉异源表达系统。与现有技术相比,本发明专利技术通过敲除α‑1,3‑葡聚糖合成基因agsB和GAG合成基因Anagd3,构建得到ΔagsBΔagd3双敲除菌株,使构巢曲霉在发酵过程中菌丝完全游离分散,并以ΔagsBΔagd3双敲除菌株为宿主构建了构巢曲霉蛋白表达系统,使异源蛋白分泌量较未改造菌株提高110%,较ΔagsB菌株提高30%。且同等酶量下ΔagsBΔagd3菌株的全细胞催化效率较未改造菌株提高68%,较ΔagsB菌株提高21%。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物,尤其是涉及一种构巢曲霉异源表达系统及其构建方法与应用


技术介绍

1、构巢曲霉属丛梗孢科、曲霉属的一种真菌,可用于食品发酵并有效产生酶、抗生素和化学物质。高性能微生物细胞工厂的发展对于食品发酵和治疗性蛋白质生产至关重要。与细菌和酵母菌相比,构巢曲霉不仅对蛋白质具有优异的翻译后修饰系统,如糖基化和二硫键形成,而且表现出优越的蛋白质分泌能力,并且可以在廉价培养基中快速生长,因此被广泛用于次生代谢物和酶的生产。然而受限于其在发酵过程中菌丝会聚集成菌丝球的特性,细胞的传质和蛋白分泌受到极大的限制。

2、因此,如何解决菌丝聚集成团以提高细胞的传质和蛋白分泌的问题至关重要。


技术实现思路

1、本专利技术的目的就是为了克服现有构巢曲霉在培养过程中存在聚集成团而影响异源表达的缺陷而提供一种构巢曲霉异源表达系统及其构建方法与应用。

2、本专利技术的目的可以通过以下技术方案来实现:

3、本专利技术的技术方案之一为提供一种构巢曲霉异源表达系统的构建方法,敲除构巢曲霉基因组中的本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种构巢曲霉异源表达系统的构建方法,其特征在于,敲除构巢曲霉基因组中α-1,3-葡聚糖合成基因agsB,并敲除GAG合成基因中的任意一个或多个,构建得到构巢曲霉异源表达系统。

2.根据权利要求1所述的构巢曲霉异源表达系统的构建方法,其特征在于,所述构巢曲霉基因组中的GAG合成基因为与烟曲霉基因组中GAG合成基因的同源基因,其氨基酸序列的相似性大于60%,所述烟曲霉基因组中GAG合成基因选自uge3、gtb3、agd3、sph3、ega3基因中的任意一个或多个。

3.根据权利要求2所述的构巢曲霉异源表达系统的构建方法,其特征在于,敲除构巢曲霉基因组中α-1,3-...

【技术特征摘要】

1.一种构巢曲霉异源表达系统的构建方法,其特征在于,敲除构巢曲霉基因组中α-1,3-葡聚糖合成基因agsb,并敲除gag合成基因中的任意一个或多个,构建得到构巢曲霉异源表达系统。

2.根据权利要求1所述的构巢曲霉异源表达系统的构建方法,其特征在于,所述构巢曲霉基因组中的gag合成基因为与烟曲霉基因组中gag合成基因的同源基因,其氨基酸序列的相似性大于60%,所述烟曲霉基因组中gag合成基因选自uge3、gtb3、agd3、sph3、ega3基因中的任意一个或多个。

3.根据权利要求2所述的构巢曲霉异源表达系统的构建方法,其特征在于,敲除构巢曲霉基因组中α-1,3-葡聚糖合成基因agsb,并敲除与agd3的同源基因anagd3。

4.根据权利要求1所述的构巢曲霉异源表达系统的构建方法,其特征在于,通过crispr-cas9编辑技术敲除α-1,3-葡聚糖合成基因agsb和gag合成基因。

5.根据权利要求4所述的构巢曲霉异源表达系统的构建方法,其特征在于,敲除α...

【专利技术属性】
技术研发人员:周胜敏刘人宁
申请(专利权)人:华东理工大学
类型:发明
国别省市:

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