【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本公开文本涉及免疫学和医学领域，并且尤其涉及用于产生具有优异表达特性的复制子(例如，自复制rna(srrna)分子)的新方法。本公开文本还提供了表达此类srrna分子的核酸和重组细胞以及含有它们的药物组合物。进一步提供了用于在受试者中诱导药效学作用以及用于预防和/或治疗多种健康状况的组合物和方法。序列表的并入将所附序列表中的材料通过引用特此并入本申请。所附的名称为058462-506001wo_sequence listing_st26.xml的序列表文本文件创建于2022年11月22日，并且为14kb。
技术介绍
1、近年来，已经将若干个不同的动物病毒群通过其基因组的同源重组或直接工程化进行基因操纵。针对dna和rna病毒两者的反向遗传学系统的可用性已经为使用重组病毒(例如，作为疫苗、表达载体、抗肿瘤剂、体内基因疗法载体和药物递送媒介物)创造了新的前景。
2、这方面的最新进展包括重组复制子(例如，自复制rna(srrna))，其源自正链rna病毒的基因组，并且代表了用于获得新型安全有效疫苗和药物递送媒介物的有力工具。特别地...
【技术保护点】
1.一种用于鉴定和/或表征自复制RNA(srRNA)构建体的方法，所述方法包括：
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述PCI的编码序列包含单个多肽的编码序列或多个多肽的编码序列。
3.根据权利要求2所述的方法，其中所述多个多肽的编码序列在单个开放阅读框内(即，在多顺反子ORF中)彼此可操作地连接。
4.根据权利要求2所述的方法，其中所述多个多肽通过一个或多个连接序列彼此可操作地连接。
5.根据权利要求4所述的方法，其中所述多个连接序列中的连接序列包括自我蛋白水解肽序列。
6.根据权利要求5所述的方法，其中所...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种用于鉴定和/或表征自复制rna(srrna)构建体的方法，所述方法包括：
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述pci的编码序列包含单个多肽的编码序列或多个多肽的编码序列。
3.根据权利要求2所述的方法，其中所述多个多肽的编码序列在单个开放阅读框内(即，在多顺反子orf中)彼此可操作地连接。
4.根据权利要求2所述的方法，其中所述多个多肽通过一个或多个连接序列彼此可操作地连接。
5.根据权利要求4所述的方法，其中所述多个连接序列中的连接序列包括自我蛋白水解肽序列。
6.根据权利要求5所述的方法，其中所述自我蛋白水解肽序列包含源自以下的一个或多个自我蛋白水解切割序列：钙依赖性丝氨酸内切蛋白酶(弗林蛋白酶)、猪捷申病毒-1 2a(p2a)、口蹄疫病毒(fmdv)2a(f2a)、马甲型鼻炎病毒(erav)2a(e2a)、明脉扁刺蛾β四体病毒2a(t2a)、质型多角体病毒2a(bmcpv2a)、软化病病毒2a(bmifv2a)或其组合。
7.根据权利要求4至6中任一项所述的方法，其中所述多个多肽的编码序列通过一个或多个内部核糖体进入位点(ires)彼此可操作地连接。
8.根据权利要求7所述的方法，其中所述一个或多个ires选自病毒ires、细胞ires和人工ires。
9.根据权利要求7至8中任一项所述的方法，其中所述一个或多个ires选自卡波西肉瘤相关疱疹病毒(kshv)ires、肝炎病毒ires、瘟病毒属ires、蟋蟀麻痹病毒属ires、禾谷缢管蚜(rhopalosiphum padi)病毒ires、成纤维细胞生长因子ires、血小板源性生长因子ires、血管内皮生长因子ires、胰岛素样生长因子ires、小rna病毒ires、脑心肌炎病毒(emcv)ires、pim-1 ires、p53 ires、apaf-1 ires、tdp2 ires、l-myc ires和c-myc ires。
10.根据权利要求1至9中任一项所述的方法，其中所述pci包含选自微生物蛋白、病毒蛋白、细菌蛋白、真菌蛋白、哺乳动物蛋白以及其中任何项的组合的一种或多种多肽。
11.根据权利要求1至10中任一项所述的方法，其中所述pci包含选自抗原分子、生物治疗分子或其中任何项的组合的一种或多种多肽。
12.根据权利要求1至11中任一项所述的方法，其中所述pci包含选自肿瘤相关抗原、肿瘤特异性抗原、新抗原以及其中任何项的组合的一种或多种抗原多肽。
13.根据权利要求12所述的方法，其中所述一种或多种抗原多肽包含雌激素受体、细胞内信号转导酶和人表皮生长受体。
14.根据权利要求10至13中任一项所述的方法，其中所述一种或多种抗原多肽选自esr1、pi3k、her2、her3、其中任何项的变体以及其中任何项的组合。
15.根据权利要求1至11中任一项所述的方法，其中所述pci包含选自以下的一种或多种生物治疗性多肽：免疫调节剂、血管生成调节剂、细胞外基质调节剂、代谢调节剂、神经调节剂以及其中任何项的组合。
16.根据权利要求15所述的方法，其中所述pci包含选自以下的一种或多种细胞因子：趋化因子、干扰素、白细胞介素、淋巴因子和肿瘤坏死因子。
17.根据权利要求16所述的方法，其中所述pci包含选自il-1α、il-1β、il-2、il-3、il-4、il-5、il-6、il-7、il-8、il-9、il-10、il-11、il-12、il-15、il-15、il-17、il-23、il-27、il-35的一种或多种白细胞介素、ifnγ以及其中任一种的亚基。
18.根据权利要求10至17中任一项所述的方法，其中所述一种或多种生物治疗性多肽选自il-12a、il-12b、il-1ra以及其中任何项的组合。
19.根据权利要求1至18中任一项所述的方法，其中步骤(a)包括提供多个srrna表达构建体，每个srrna表达构建体包含所述pci的变体的编码序列。
20.根据权利要求19所述的方法，其中(a)中的提供包括：
21.根据权利要求19所述的方法，其中(a)中的提供包括：
22.根据权利要求20至21中任一项所述的方法，其中所述多个pci变体中的pci变体包含一个或多个分子改变。
23.根据权利要求22所述的方法，其中所述pci变体中的一个或多个分子改变选自缺失、取代、插入、重复、突变、移码变体、剪接变体以及其中任何项的组合。
24.根据权利要求22至23中任一项所述的方法，其中所述一个或多个分子改变被配置成沿着所述抗原序列的长度串联布置的多个改变盒。
25.根据权利要求24所述的方法，其中所述多个改变盒中的改变盒包含一个、两个、三个、四个、五个或更多个分子改变。
26.根据权利要求24至25中任一项所述的方法，其中所述多个改变盒通过一个或多个接头彼此可操作地连接。
27.根据权利要求26所述的方法，其中所述一个或多个接头中的接头包含合成的化合物接头或肽接头。
28.根据权利要求27所述的方法，其中所述肽接头包含选自以下的氨基酸序列：aay、eaaak(seq id no:1)、rvrr(seq id no:2)、ggggs(seq id no:3)和gpgpg(seq id no:4)。
29.根据权利要求1至28中任一项所述的方法，其中步骤(b)中的所述分析所述pci的水平和/或功能在体外、体内或离体进行。
30.根据权利要求29所述的方法，其中所述分析所述pci的水平和/或功能包括免疫印迹分析、荧光流式细胞术分析、酶联免疫测定分析、免疫原性分析、生物活性分析和/或疾病模型中的功效。
31.根据权利要求1至29中任一项所述的方法，其中步骤(d)中的所述递送系统赋予至少一种药效学作用的能力的所述分析在体内或离体进行。
32.根据权利要求1至31中任一项所述的方法，其中所述至少一种药效学作用包括以下中的一种或多种：免疫原性作用、生物标志物反应、治疗作用、预防作用、期望的作用、不期望的作用、副作用和在疾病模型中的作用。
33.根据权利要求32所述的方法，其中所述至少一种药效学作用包括诱导免疫应答。
34.根据权利要求1至33中任一项所述的方法，其中所述递送系统包含生理缓冲液、脂质体、基于脂质的纳米颗粒(lnp)、聚合物纳米颗粒、病毒复制子颗粒(vrp)、微球、免疫刺激复合物(iscom)、生物活性配体的缀合物或其中任何项的组合。
35.根据权利要求34所述的方法，其中所述lnp递送系统包含阳离子脂质、可电离的阳离子脂质、阴离子脂质或中性脂质。
36.根据权利要求34所述的方法，其中所述lnp递送系统包含选自以下的可电离阳离子脂质：alc-0315、c12-200、ln16、mc3、md1、sm-102以及其中任何项的组合。
37.根据权利要求34所述的方法，其中所述lnp包含选自以下的阳离子脂质：98n12-5、c12-200、c14-peg2000、dlin-kc2-dma(kc2)、dlin-mc3-dma(mc3)、xtc、md1、7c1以及其中任何项的组合。
38.根据权利要求34所述的方法，其中所述lnp包含选自以下的中性脂质：dpsc、dppc、popc、dope、sm以及其中任何项的组合。
39.根据权利要求34所述的方法，其中所述lnp包含选自以下的脂质：c12-200、c14-peg2000、dope、dmg-peg2000、dspc、dotma、dospa、dotap、dmrie、dc-胆固醇、dotap-胆固醇、gap-dmorie-dpype和gl67a-dope-dmpe-聚乙二醇(peg)。
40.根据权利要求34至39中任一项所述的方法，其中在所述lnp递送系统中，脂质与核酸的质量比为约100:1至约3:1、约70:1至10:1或16:1至4:1。
41.根据权利要求40所述的方法，其中在所述lnp递送系统中，脂质与核酸的质量比为约16:1至4:1。
42.根据权利要求40至41中任一项所述的方法，其中在所述lnp递送系统中，脂质与核酸的质量比为约20:1。
43.根据权利要求40至41中任一项所述的方法，其中在所述lnp递送系统中，脂质与核酸的质量比为约8:1。
44.根据权利要求34至43中任一项所述的方法，其中所述基于脂质的纳米颗粒(lnp)的平均直径小于约1000nm、约500nm、约250nm、约200nm、约150nm、约100nm、约75nm、约50nm或约25nm。
45.根据权利要求44所述的方法，其中所述lnp的平均直径的范围为约70nm至100nm。<...
【专利技术属性】
技术研发人员：N·S·王，S·J·米亚克斯通纳，P·阿利亚赫马德，
申请(专利权)人：瑞普利科特生物科学公司，
类型：发明
国别省市：
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