【技术实现步骤摘要】
本公开涉及生物，特别涉及狼疮抗凝物确认试剂和其制备方法及使用方法。
技术介绍
1、狼疮抗凝物(lupus anticoagulant，la)是一种针对各种负电荷磷脂-蛋白质复合物的自身抗体。在体外凝血试验中，la表现出特异性结合凝血反应中的磷脂，干扰依赖磷脂的凝血反应导致凝血时间延长，通常表现为aptt的延长，la较高滴度时pt也可表现出延长。在体内，la可激活血小板和(或)通过β2-gpi结合，诱导黏附分子、组织因子表达及补体活化而产生血栓前状态，促进血栓形成；与血管内皮细胞膜磷脂作用，干扰内皮细胞释放纤溶酶原激活物而抑制纤溶；与血小板膜磷脂作用，干扰花生四烯酸代谢，促进血小板活化；可抑制与磷脂相关的内源性抗凝物质，使血液凝固性增强，如通过竞争磷脂酰乙醇胺，抑制蛋白c途径，引起获得性活化蛋白c抵抗，使之减少或丧失对fⅴa和fⅷa的快速水解作用。
2、la临床主要应用于抗磷脂综合征(antiphospholipid syndrome，aps)、系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus，sle)、血栓栓塞性疾病、复发性流产(rsa)等。la作为一种病理性循环抗凝物质，健康人体中并不常见。la可随着年龄增加而增加，多表现为弱阳性，无aps临床表现。成人的la多见于女性的aps、sle、结缔组织病等自身免疫性疾病患者，其中sle患者的la阳性率可达30％至40％。持续的la阳性患者被认为有较高的血栓形成和复发风险，也是不明原因习惯性流产，尤其是怀孕中后期的流产、死胎、易栓性疾病及某些自身免疫
3、国际血栓和止血协会(isth)分别在2009年和2020年指南中建议，对怀疑抗磷脂综合征或不能解释的aptt延长的患者进行la检测。指南推荐使用两种方法来提高la的检出率，分别为基于共同凝血途径的drvvt方法、基于内源性凝血途径的以硅为激活剂的aptt方法。两种方法各有利弊，drvvt法反应路径短，受内外源凝血因子及凝血因子抑制物影响较小，但是drvvt法对la的灵敏度较差，其原料(rvvx为一种蛇毒酶)成本高、酶活性难稳定。基于内源性凝血途径的以硅为激活剂的aptt方法，易受内源性凝血因子缺陷和因子抑制物的影响，但是该方法对la的灵敏度高，其原料(带负电荷的硅物质为无机物)成本低、稳定性好。
4、目前la检测方法学均采用凝固法，是一种评估人枸橼酸钠抗凝血浆的凝血功能性检测。la的检测试验分为筛选试验和确认试验，当上述两个试验的结果无法解释时，需要开展混合试验，以明确导致结果异常的原因是狼疮抗凝物、凝血因子缺乏或凝血因子抑制物的存在。筛选试验所用的筛选试剂通常含微量的磷脂，对la敏感，抗凝效果显著；确认试验所用的确认试剂通常增加磷脂的含量以抵消la的抗凝作用；筛选试剂和确认试剂的主要区别在于磷脂含量的不同。
技术实现思路
1、根据本公开的一方面，提供了一种狼疮抗凝物的确认试剂。
2、在一些实施方案中，提供了一种狼疮抗凝物的确认试剂，其包含或由如下组成：
3、25％至40％v/v内源性凝血反应的激活剂，
4、0.6g/l至1.0g/l混合磷脂，
5、4g/l至6g/l缓冲液，
6、12g/l至20g/l保护剂，
7、0.5mg/l至1.5mg/l硫酸锌，
8、0.08‰至0.15‰v/v氧化抑制剂，
9、0.08‰至0.15‰v/v非离子型表面性剂，
10、1‰至3‰v/v防腐剂，和
11、水。
12、在一些实施方案中，提供了一种狼疮抗凝物的确认试剂，其中所述内源性凝血反应的激活剂是硅酸盐。
13、在一些实施方案中，硅酸盐制备成硅酸盐分散液的形式。专利技术人发现将硅酸盐分散液作为内源性凝血反应的激活剂，具有成分均一、不易沉降、批间差小、成本低等优点。
14、在一些实施方案中，硅酸盐制备成二氧化硅的水分散液的形式。
15、在一些实施方案中，混合磷脂是市售可获得的pe、pc、ps的混合物。
16、在一些实施方案中，缓冲液是巴比妥钠缓冲液。巴比妥钠缓冲液，具有优越的缓冲能力。
17、在一些实施方案中，所述保护剂是甘氨酸。专利技术人发现添加甘氨酸能够保护和稳定凝血反应。
18、在一些实施方案中，所述氧化抑制剂是生育酚乙酸酯。专利技术人发现试剂中含足量的混合磷脂，添加生育酚乙酸酯能够保持磷脂的稳定性。
19、在一些实施方案中，所述非离子型表面性剂是聚氧乙烯月桂醚。专利技术人发现添加非离子型表面性剂聚氧乙烯月桂醚增强了混合磷脂和生育酚乙酸酯在溶液中的溶解性，并提高确认试剂的澄清度和均一性。
20、在一些实施方案中，所述防腐剂是双(羟甲基)咪唑烷基脲和5-溴-5-硝基-1,3-二恶烷丙二醇的组合。专利技术人出乎意料地发现双(羟甲基)咪唑烷基脲和5-溴-5-硝基-1,3-二恶烷丙二醇形成了协同抑菌效果，最大程度上抑制微生物的生长。双(羟甲基)咪唑烷基脲对革兰式阳性菌、革兰式阴性菌，包括假单孢菌有抑菌效果，对酵母菌霉菌有选择地抑制作用。5-溴-5-硝基-1,3-二恶烷丙二醇能抑制细菌、真菌、酵母菌生长。两个防腐剂联用，其广谱活性、在使用浓度下的低毒性，从而使确认试剂具有更长的效期。
21、在一些实施方案中，本公开的狼疮抗凝物的确认试剂，其包含或由如下组成：
22、25％至40％v/v硅酸盐分散液，
23、0.6g/l至1.0g/l混合磷脂，
24、4g/l至6g/l巴比妥钠缓冲液，
25、12g/l至20g/l甘氨酸，
26、0.5mg/l至1.5mg/l硫酸锌，
27、0.08‰至0.15‰v/v生育酚乙酸酯，
28、0.08‰至0.15‰v/v聚氧乙烯月桂醚，
29、0.1‰至0.3‰v/v双(羟甲基)咪唑烷基脲，
30、1.5‰至2.5‰v/v 5-溴-5-硝基-1,3-二恶烷丙二醇，和
31、水。
32、在具体的实施方案中，本公开的狼疮抗凝物的确认试剂，其包含或由如下组成：
33、30％v/v二氧化硅的水分散液，
34、0.8g/l混合磷脂，
35、5g/l巴比妥钠缓冲液，
36、19g/l甘氨酸，
37、1mg/l硫酸锌，
38、0.1‰v/v生育酚乙酸酯，
39、0.1‰v/v聚氧乙烯月桂醚，
40、0.2‰v/v双(羟甲基)咪唑烷基脲，
41、2‰v/v 5-溴-5-硝基-1,3-二恶烷丙二醇，和
42、水。
43、在一些实施方案中，本公开的狼疮抗凝物的确认试剂，其ph值为6.9至7.1。
44、在一些实施方案中，本公开的狼疮抗凝物的确认试剂，其ph值为7本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种狼疮抗凝物的确认试剂，其包含或由如下组成：
2.根据权利要求1所述的狼疮抗凝物的确认试剂，其包含或由如下组成：
3.根据权利要求2所述的狼疮抗凝物的确认试剂，其包含或由如下组成：
4.根据权利要求1至3中任一项所述的狼疮抗凝物的确认试剂，其pH值为6.9至7.1。
5.根据权利要求4所述的狼疮抗凝物的确认试剂，其pH值为7.0。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的狼疮抗凝物的确认试剂，其是液体制剂。
7.一种狼疮抗凝物的确认试剂的制备方法，包括步骤：
【技术特征摘要】
1.一种狼疮抗凝物的确认试剂，其包含或由如下组成：
2.根据权利要求1所述的狼疮抗凝物的确认试剂，其包含或由如下组成：
3.根据权利要求2所述的狼疮抗凝物的确认试剂，其包含或由如下组成：
4.根据权利要求1至3中任一项所述的狼疮抗凝...
【专利技术属性】
技术研发人员：张丽君，高爱民，蔡华雅，刘希，张宜，邹左军，
申请(专利权)人：北京美创新跃医疗器械有限公司，
类型：发明
国别省市：
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