一种抗人肝型脂肪酸结合蛋白单克隆抗体的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种抗人肝型脂肪酸结合蛋白单克隆抗体的制备方法，以重组大肠杆菌表达的重组人L‑FABP作为抗原，免疫Balb/c小鼠后，取免疫小鼠的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合，经过筛选，获得能稳定分泌L‑FABP抗体的杂交瘤细胞株；将杂交瘤细胞注射至小鼠腹腔，收集腹水后，通过辛酸‑硫酸铵沉淀法和Protein A亲和柱层析法两步纯化获得高纯度L‑FABP单克隆抗体。本发明专利技术方法制备的L‑FABP单克隆抗体能特异性结合于重组人L‑FABP，也能特异性结合于人尿液中天然L‑FABP，具有特异性好、结合率高的特点，可以大规模生产，广泛应用于免疫法检测人尿液以及血清中L‑FABP含量。

【技术实现步骤摘要】

(一)本专利技术属于生物医学，具体涉及一种抗人肝型脂肪酸结合蛋白单克隆抗体的制备方法。

技术介绍

0、(二)
技术介绍

1、肝型脂肪酸结合蛋白(liver fatty acid binding protein，l-fabp)，又称脂肪酸结合蛋白1，是脂肪酸结合蛋白家族的重要成员，主要在肝脏、小肠及肾脏等组织中表达。它是一种低分子量的胞浆蛋白，在哺乳动物中广泛存在，包括小肠、心、脑、骨骼肌等多种细胞内。l-fabp的主要功能是调节脂肪酸的摄取和胞内运输，能够将脂肪酸从细胞膜上运送到细胞内部，参与脂肪酸、胆固醇、胆汁酸等的转运过程。

2、l-fabp不仅在脂质代谢中起到转运作用，还与多种疾病的发生发展密切相关，如脂肪肝、肝硬化、肝癌、糖尿病等。近年来的研究发现，l-fabp不仅在肝脏疾病中有重要作用，还在肾脏疾病、肥胖、糖尿病肾病等多种疾病中发挥着关键作用，特别是在急性肾损伤(aki)的早期检测中，l-fabp作为一种新发现的生物标志物，可用于诊断和预测aki的严重程度和病因。

3、目前，检测人尿液或血清中l-fabp都采用免本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种抗人肝型脂肪酸结合蛋白单克隆抗体的制备方法，其特征在于，所述方法为：以重组大肠杆菌表达的重组人肝型脂肪酸结合蛋白L-FABP作为抗原，免疫Balb/c小鼠后，取免疫小鼠的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合，经过筛选，获得能稳定分泌L-FABP抗体的杂交瘤细胞株；将杂交瘤细胞注射至小鼠腹腔，收集腹水后，通过辛酸-硫酸铵沉淀法和ProteinA亲和柱层析法两步纯化获得高纯度L-FABP单克隆抗体。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，重组人肝型脂肪酸结合蛋白L-FABP氨基酸序列如SEQ ID No:1所示。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的能...

【技术特征摘要】

1.一种抗人肝型脂肪酸结合蛋白单克隆抗体的制备方法，其特征在于，所述方法为：以重组大肠杆菌表达的重组人肝型脂肪酸结合蛋白l-fabp作为抗原，免疫balb/c小鼠后，取免疫小鼠的脾细胞与sp2/0骨髓瘤细胞融合，经过筛选，获得能稳定分泌l-fabp抗体的杂交瘤细胞株；将杂交瘤细胞注射至小鼠腹腔，收集腹水后，通过辛酸-硫酸铵沉淀法和proteina亲和柱层析法两步纯化获得高纯度l-fabp单克隆抗体。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，重组人肝型脂肪酸结合蛋...

【专利技术属性】
技术研发人员：王洋，袁春霖，徐欣，陈婷，崔文荣，陈建澍，梅建凤，
申请(专利权)人：浙江工业大学，
类型：发明
国别省市：