一种检测板栗疫病菌的试剂盒、检测方法及应用技术

本发明专利技术提供基于RAA‑CRISPR/Cas12a快速检测板栗疫病菌的特异性引物和可视化的检测方法，特异性引物包括用于特异性检测板栗疫病菌的gRNA引物和RAA引物。本发明专利技术检测板栗疫病菌的可视化检测方法具有操作简便、检测快速、成本低、灵敏度高、特异性强及可视化的特点，将RAA扩增方法与CRISPR/Cas12a的检测方法结合来检测板栗疫病菌，通过紫外凝胶成像仪和Cas12/13专用核酸检测试纸条实现可视化检测，可实现现场快速检测板栗疫病菌，为板栗疫病菌快速检测和早期诊断提供有效方法，并为板栗疫病的监测预警及精准防控提供指导。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种植物疫病菌的检测体系和检测方法，特别涉及一种果木树疫病菌的检测体系和检测方法，属于生物。

技术介绍

1、板栗疫病菌是一种由栗疫病菌(cryphonectria parasitica)引起的毁灭性病害，是中国植物检疫对象之一。树木感病后，会导致板栗树枝腐烂和溃疡，轻则造成树势衰弱，重则全株乃至使整片栗林死亡，造成严重的经济损失。不同生长期的板栗均可能受到板栗疫病菌的侵染，感病初期无法辨认粗糙树皮上的病斑，从而导致树势衰弱甚至死亡。板栗疫病菌的传统检疫手段主要是通过病斑观察、病原显微特征等，难以对大量植株进行快速检测，费时、费力、人为误差大，难以满足现代对植物病害快速、准确、灵敏的检疫要求，因而易错过最佳防治时期。因此，建立快速、高灵敏度的板栗疫病菌检测技术对板栗疫病的防控具有重要意义。

2、随着分子生物学技术的快速发展，检测和鉴定板栗疫病菌的方法主要有普通pcr和实时荧光pcr。但传统分子生物学检测方法依赖昂贵的仪器设备，步骤复杂、耗时较长，很难满足现场快速检测的需求。基于等温扩增技术(rpa、lamp、raa等)在恒温条件下即本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种快速检测板栗疫病菌的试剂盒，其特征在于，包括gRNA引物、RAA扩增引物，其中，所述gRNA引物序列为：SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2；所述RAA扩增引物序列为：SEQ IDNO.3、SEQ ID NO.4。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，还包括用于可视化观察板栗疫病菌的ssDNA探针，其中所述ssDNA探针为用于可视化荧光检测的板栗疫病菌的ssDNA1探针序列，SEQ ID NO.11或/和用于Cas12/13专用核酸检测试纸条检测的板栗疫病菌的ssDNA2探针序列，SEQ ID NO.10。

3.根据权利要求2所述的试剂盒...

【技术特征摘要】

1.一种快速检测板栗疫病菌的试剂盒，其特征在于，包括grna引物、raa扩增引物，其中，所述grna引物序列为：seq id no.1或seq id no.2；所述raa扩增引物序列为：seq idno.3、seq id no.4。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，还包括用于可视化观察板栗疫病菌的ssdna探针，其中所述ssdna探针为用于可视化荧光检测的板栗疫病菌的ssdna1探针序列，seq id no.11或/和用于cas12/13专用核酸检测试纸条检测的板栗疫病菌的ssdna2探针序列，seq id no.10。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，

4.一种快速检测板栗疫病菌的方法，其特征在于，包括以下步骤：

5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤(2)中所述pcr扩增反应的引物为cpsge1-5f和cpsge1-5r，其中所述引物cpsge1-5f、cpsge1-5r的序列分别为：seq...

【专利技术属性】
技术研发人员：熊典广，吴浩雨，林晓榕，田呈明，
申请(专利权)人：北京林业大学，
类型：发明
国别省市：