一种融合核酸外切酶的CRISPR/Cas12i基因编辑衍生系统及其应用技术方案

本发明专利技术公开了一种融合核酸外切酶的CRISPR/Cas12i基因编辑衍生系统及其应用，通过XTEN序列将核酸外切酶T5EXO与高保真核酸内切酶hfCas12Max融合，并通过筛选T5EXO和XTEN序列的分子组合，实现了利用hfCas12Max与T5EXO融合表达提高CRISPR/Cas12i系统介导的基因编辑的效率。本发明专利技术利用对Cas12i的衍生改造所获得的CRISPR/Cas12i‑T5EXO基因编辑系统具有更高的编辑效率，可以在绵羊遗传育种等方面发挥更广泛的应用价值。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于基因编辑，涉及一种采用核酸外切酶t5exo与核酸内切酶hfcas12max融合策略的crispr/cas12i基因编辑衍生系统的构建与应用。

技术介绍

1、crispr/cas是一种原核生物中rna介导的可以识别并分解异源的遗传物质的获得性免疫防御系统，在古菌和细菌中广泛存在。crispr是成簇的有规律间隔的回文重复序列，cas是crispr核酸酶蛋白。crispr/cas免疫防御系统被分为3种类型，即typeⅰ型、typeⅱ型和typeⅲ型。在这三个类型当中，ⅱ型crispr系统crispr/cas9是目前为止研究及应用最为广泛的系统。在crispr/cas9基因编辑系统中，向导rna(guide rna,grna)替代了之前技术中的crrna以及tracrrna的作用，其可以在grna的作用下识别靶序列的原型间隔区相邻基序，也就是pam位点，然后引导核酸酶cas9切割靶位点，并利用非同源末端连接或者同源重组的修复方式，实现对基因的敲除和修饰等编辑结果。

2、随着基于crispr/cas的第三代基因编辑技术的广泛应用，为提高其编本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种核酸内切酶衍生蛋白基因，其特征在于：包括经连接序列串联的核酸外切酶与Cas12i的基因序列，所述Cas12i为Cas蛋白hfCas12Max。

2.一种CRISPR/Cas12i编辑工具，其特征在于：该编辑工具包括用于融合表达核酸外切酶与Cas12i的基因元件，所述Cas12i为Cas蛋白hfCas12Max。

3.根据权利要求2所述一种CRISPR/Cas12i编辑工具，其特征在于：所述编辑工具还包括crRNA表达元件。

4.根据权利要求3所述一种CRISPR/Cas12i编辑工具，其特征在于：所述基因元件具体包括II型启动子、上游核定位信号...

【技术特征摘要】

1.一种核酸内切酶衍生蛋白基因，其特征在于：包括经连接序列串联的核酸外切酶与cas12i的基因序列，所述cas12i为cas蛋白hfcas12max。

2.一种crispr/cas12i编辑工具，其特征在于：该编辑工具包括用于融合表达核酸外切酶与cas12i的基因元件，所述cas12i为cas蛋白hfcas12max。

3.根据权利要求2所述一种crispr/cas12i编辑工具，其特征在于：所述编辑工具还包括crrna表达元件。

4.根据权利要求3所述一种crispr/cas12i编辑工具，其特征在于：所述基因元件具体包括ii型启动子、上游核定位信号序列、cas12i的基因序列、连接序列、核酸外切酶的基因序列、下游核定位信号序列和polya终止序列，crrna表达元件具体包括iii型启动子和c...

【专利技术属性】
技术研发人员：王小龙，魏迎辉，徐坤，郑文新，吴伟伟，陈秋崇，姚方瑶，罗沐华，
申请(专利权)人：西北农林科技大学，
类型：发明
国别省市：