蛋白酶变体以及对其进行编码的多核苷酸制造技术

本发明专利技术涉及蛋白酶变体以及用于获得蛋白酶变体的方法。本发明专利技术还涉及编码这些变体的多核苷酸；包括这些多核苷酸的核酸构建体、载体以及宿主细胞；以及使用这些变体的方法。

【技术实现步骤摘要】

专利
本专利技术涉及相对于亲本蛋白酶在一种或多种特性中展示出改变的新颖蛋白酶变体，所述特性包括：清洗性能、洗涤剂稳定性和/或储存稳定性。本专利技术的变体适合用于在清洁过程和洗涤剂组合物中使用，如洗衣组合物和餐具清洗组合物，包括手洗和自动餐具清洗组合物。本专利技术还涉及编码这些变体的分离的dna序列、表达载体、宿主细胞以及用于产生和使用本专利技术的蛋白酶变体的方法。相关技术说明酶作为清洗配制品的部分已经在洗涤剂工业使用了数十年。从商业视角看，蛋白酶在这样的配制品中是最相关的酶，而其他酶(包括脂肪酶、淀粉酶、纤维素酶、半纤维素酶或多种酶的混合物)也是通常使用的。为了改进蛋白酶的成本和/或性能，对具有改变的特性，如在低温下增加的活性、增加的稳定性、在给定的ph下增加比活性、改变的ca2+依赖性、在其他洗涤剂成分(例如漂白剂、表面活性剂等)的存在下增加的稳定性等的蛋白酶进行着持续搜寻。wo 91/000345(诺维信公司(novozymes a/s))涉及突变枯草杆菌蛋白酶，其中与该亲本蛋白酶相比，该净静电电荷已经改变。这些枯草杆菌蛋白酶是蛋白酶的枯草杆菌酶家族的一个亚组，其被广泛本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种蛋白酶变体，其包括一个或多个选自下组的改变，该组由以下各项组成：S27K、V2H、S4K、S4H、T5K、Q6K、N16K、N16H、D17N、Q18K、Q18H、S19K、T24K、T24H、T24R、Y39R、S41K、L43H、G47K、E50Q、E50T、E50L、Q57K、S58K、N59K、D63N、G64H、S65K、T67K、Q70H、G85R、G85H、S86K、N87K、Y92R、Q97K、D108N、D108S、D108A、N109K、S111K、S111R、G112R、S114K、D116S、D116A、A118R、A118K、D126G、D126W、D1...

【技术特征摘要】

1.一种蛋白酶变体，其包括一个或多个选自下组的改变，该组由以下各项组成：s27k、v2h、s4k、s4h、t5k、q6k、n16k、n16h、d17n、q18k、q18h、s19k、t24k、t24h、t24r、y39r、s41k、l43h、g47k、e50q、e50t、e50l、q57k、s58k、n59k、d63n、g64h、s65k、t67k、q70h、g85r、g85h、s86k、n87k、y92r、q97k、d108n、d108s、d108a、n109k、s111k、s111r、g112r、s114k、d116s、d116a、a118r、a118k、d126g、d126w、d126k、e127q、e127k、e127l、e127s、s129k、r130k、t131k、t131h、g132h、g142k、g142r、s143k、s143h、s144k、d147n、d147s、d147*、d147q、d147h、d147w、s148k、l149k、d155h、y156r、y156h、g159h、g174r、g174h、t177k、l184h、v185k、n186k、n186r、e194*、e194s、e194k、e194q、n195h、n195k、v196h、q197k、q197h、q197r、q198k、n199k、g200h、d206n、d206h、f207h、n212k、a214r、a214k、t215k、d218n、d218h、d218r、y219r、y219h、i220k、i220h、q222k、d225n、a233r、s234k、e236c、t241k、n245k、t246k、i247k、s248k、i264r、a267h、n268k、n268h、t269k、t269h、s270k、s272k、s274k、t278k、t278h、e279q、e279h、v286h、v286k、y287r、y287h、d288n、d288k、i293r、i293k、t297k、d299r、以及k311r，其中每个位置对应于seq id no:3，并且其中该蛋白酶变体与seq id no:3具有至少60％序列一致性。

2.如权利要求1所述的蛋白酶变体，其包括一个或多个选自下组的改变，该组由以下各项组成：s27k、n109k以及n199k。

3.如权利要求1所述的蛋白酶变体，相比于该亲本或相比于具有seq id no:3的蛋白酶，该蛋白酶变体具有选自下组的改进的特性，该组由以下各项组成：清洗性能、蛋白酶活性、热活性曲线、热稳定性、ph活性曲线、ph稳定性、底物/辅因子特异性、改进的表面特性、底物特异性、产物特异性、增加的稳定性、在储存条件下的改进的稳定性、以及化学稳定性。

4.如权利要求1-3中任一项所述的蛋白酶变体，其中该变体选自下组，该组由以下各项组成：

5.如权利要求1-3中任一项所述的蛋白酶变体，其中该变体与seq id no:3具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99序列一致性。

6.如权利要求1-3中任一项所述的蛋白酶变体，其中相比于seq id no:3的改变的总数是1-20个，例如1-10个和1-5个，如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、或15个改变。

7.一种洗涤剂组合物，其包括根据权利要求1至6中任一项所述的蛋白酶变体。

8.如权利要求7所述的洗涤剂组合物，其进一步包括一种或多种洗涤剂组分。

9.根据权利要求7-8中任一项所述的洗涤剂组合物，其进一步包括一种或多种选自下组的另外的酶，该组由以下各项组成：蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、角质酶、纤维素酶、内切葡聚糖酶、木葡聚糖酶、果胶酶、果胶裂解酶、黄原胶酶、过氧化物酶、卤代过氧合酶、过氧化氢酶以及甘露聚糖酶，或其任何混合物。

10.根据权利要求7-8中任一项所述的洗涤剂组合物，其处于棒，均匀的片剂，具有两层或更多层的片剂，具有一个或多个室的袋，规则的或压缩的粉末，颗粒，糊，凝胶，或规则的、压缩的或浓缩的液体的形式。

11.根据权利要求7-10中任一项所述的洗涤剂组合物在清洁过程如洗衣或硬表面清洁如餐具清洗中的用途。

12.一种用于获得蛋白酶变体的方法，该方法包括向亲本蛋白酶中引入一个或多个以下的改变：seq id no 3的s27k、v2h、s4k、s4h、t5k、q6k、n16k、n16h、d17n、q18k、q18h、s19k、t24k、t24h、t24r、y39r、s41k、l43h、g47k、e50q、e50t、e50l、q57k、s58k、n59k、d63n、g64h、s65k、t67k、q70h、g85r、g85h、s86k、n87k、y92r、q97k、d108n、d108s、d108a、n109k、s111k、s111r、g112r、s114k、d116s、d116a、a118r、a118k、d126g、d126w、d126k、e127q、e127k、e127l、e127s、s129k、r130k、t131k、t131h、g132h、g142k、g142r、s143k、...

【专利技术属性】
技术研发人员：J·尼尔森，P·赫德，E·P·弗里斯，
申请(专利权)人：诺维信公司，
类型：发明
国别省市：