一种α-葡萄糖苷酶抑制剂的筛选方法技术

本发明专利技术提供了一种α‑葡萄糖苷酶抑制剂的筛选方法，属于药物筛选技术领域。本发明专利技术所述筛选方法采用碱提酸沉法提取猪小肠黏蛋白，并构建肠黏液层Transwell模型，再于低氧环境下将α‑葡萄糖苷酶抑制剂加入小室内进行转运，而后下室取样测定其对α‑葡萄糖苷酶活性的影响。本发明专利技术所述筛选方法，同时考虑了氧气浓度和黏液层阻隔两种影响因素，更有效模拟了抑制剂的真实胃肠道行为，解决了现有筛选方法下α‑葡萄糖苷酶抑制剂体内外活性差异大的问题，保证了筛选方法的可靠性和有效性。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于药物筛选，具体涉及一种α-葡萄糖苷酶抑制剂的筛选方法。

技术介绍

1、餐后高血糖会导致胰岛素抵抗、脂代谢紊乱和氧化应激，是预测或诊断ⅱ型糖尿病的主要指标，也是相关并发症的独立危险因素。α-葡萄糖苷酶抑制剂可延缓碳水化合物消化、且不影响蛋白质和脂质代谢，是改善餐后高血糖的理想策略。但是，市售α-葡萄糖苷酶抑制剂类口服药(如阿卡波糖、伏格列波糖和米格列醇)存在胃肠道副作用、疗效受限于膳食结构和患者依从性差等问题。因此，亟需挖掘新型α-葡萄糖苷酶抑制剂。大量研究表明，天然产物是筛选安全有效α-葡萄糖苷酶抑制剂的结构库，以植物多酚最为突出。

2、目前，α-葡萄糖苷酶抑制剂的筛选方法主要有3种：游离酶法、固定化酶法和计算机虚拟筛选法。游离酶法是将抑制剂加入酶与底物混合溶液后，通过分光光度计、高效液相色谱和毛细管电泳等检测产物含量变化以评价其抑制活性。常见反应体系包括对硝基苯-α-d-吡喃葡萄糖苷(底物)—对硝基苯酚(产物)、2-o-α-d-吡喃葡萄糖基-l-抗坏血酸—3,3’,5,5’-四甲基联苯胺(产物)和麦芽糖(底物)—葡萄糖(产物)。本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种α-葡萄糖苷酶抑制剂的筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：将提取的猪小肠黏蛋白溶解于PBS后加入到Transwell小室中，置于含有PBS的第一细胞培养板中培养至形成黏液层，得肠黏液层Transwell模型；

2.根据权利要求1所述筛选方法，其特征在于，所述猪小肠黏蛋白的提取方法，包括：将新鲜获取的猪小肠分割成若干均匀长度的段，去离子水冲洗后，填充碱性溶液后两段系紧，孵育一段时间后第一离心收集上清，调节上清液pH值至酸性，第二离心后收集沉淀；

3.根据权利要求2所述筛选方法，其特征在于，每段猪小肠的长度为15～20cm，并在去离子水冲洗后，填充0.01～0...

【技术特征摘要】

1.一种α-葡萄糖苷酶抑制剂的筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：将提取的猪小肠黏蛋白溶解于pbs后加入到transwell小室中，置于含有pbs的第一细胞培养板中培养至形成黏液层，得肠黏液层transwell模型；

2.根据权利要求1所述筛选方法，其特征在于，所述猪小肠黏蛋白的提取方法，包括：将新鲜获取的猪小肠分割成若干均匀长度的段，去离子水冲洗后，填充碱性溶液后两段系紧，孵育一段时间后第一离心收集上清，调节上清液ph值至酸性，第二离心后收集沉淀；

3.根据权利要求2所述筛选方法，其特征在于，每段猪小肠的长度为15～20cm，并在去离子水冲洗后，填充0.01～0.05mol/l的naoh溶液。

4.根据权利要求2所述筛选方法，其特征在于，所述孵育的温度为2～8℃，时间为24～36h。

5.根据权...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈士国，王艺，潘海波，叶兴乾，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：