一种基于磁式液滴微流控的单分子检测方法及应用技术

本发明专利技术属于分子生物学与生物检测技术领域，具体涉及一种基于磁式液滴微流控的单分子检测方法及应用。本发明专利技术提供的基于磁式液滴微流控的单分子检测方法主要包括磁珠捕获、液滴生成、信号检测及数据分析等过程。在磁珠捕获时，将包被有捕获抗体的磁珠、待测样本及检测抗体等共同孵育。通过磁珠将目标分子捕获，并与检测分子结合，反应体系被均匀分配至大量皮升至纳升级的微液滴中进行信号放大，每个液滴含有0个或1个目标分子。在进行信号放大后，高通量读取每个液滴的光信号。本发明专利技术提供的检测方法具有检测灵敏度高，线性范围大，检出结果准确，效率高，检测成本低等优点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于分子生物学与生物检测，具体涉及一种基于磁式液滴微流控的单分子检测方法及应用。

技术介绍

1、重大疾病例如癌症、自身免疫性疾病、神经退行性疾病、心血管疾病等的诊断治疗尤其依赖对生物标志物的检测，生物标志物包括病原体、病毒、细胞因子、蛋白或核酸等分子。常规检测技术通常分为两类，第一类是免疫检测例如酶联免疫吸附(elisa)，第二类是核酸检测例如荧光定量pcr(qpcr)，这两类检测技术都是重要的临床检验手段，在疾病诊断、药物分析等方面起到关键作用。一方面，免疫检测利用荧光色素或酶标记的抗体或抗原检测样本中的生物标志物，形成发光免疫复合物，通过光学成像对光信号变化进行检测，根据标准曲线对样本中的生物标志物进行定量。另一方面，核酸检测利用聚合酶链式反应直接将目标核酸以指数级扩增，通过荧光色素标记的探针实现信号放大，对光信号积累实时监测，通过标准曲线对目标核酸进行定量分析。常规检测技术的优点是特异性强、灵敏度高和简便，但每次检测都需要制作标准曲线来定量，需消耗大量试剂。在已发现的生物标志物中，蛋白类占有重要地位，但蛋白无法使用聚合酶链式反应进行指数级扩本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种基于磁式液滴微流控的单分子检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.如权利要求1所述的单分子检测方法，其特征在于，步骤S1的经修饰的检测标记包括检测抗体及检测探针，所述修饰方式包括添加DNA标签、添加荧光纳米颗粒、添加酶标记。

3.如权利要求2所述的单分子检测方法，其特征在于，所述添加DNA标签时，DNA标签通过功能修饰团偶联检测抗体，所述功能修饰团包括氨基、羧基、对甲苯磺酰基、巯基、链霉亲和素、生物素或琥珀酰亚胺酯；所述添加荧光纳米颗粒时，荧光纳米颗粒与检测抗体的偶联反应通过共价修饰、生物素修饰、螯合作用、空间包裹、疏水作用以及静电吸附作用中的一种进行；...

【技术特征摘要】

1.一种基于磁式液滴微流控的单分子检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.如权利要求1所述的单分子检测方法，其特征在于，步骤s1的经修饰的检测标记包括检测抗体及检测探针，所述修饰方式包括添加dna标签、添加荧光纳米颗粒、添加酶标记。

3.如权利要求2所述的单分子检测方法，其特征在于，所述添加dna标签时，dna标签通过功能修饰团偶联检测抗体，所述功能修饰团包括氨基、羧基、对甲苯磺酰基、巯基、链霉亲和素、生物素或琥珀酰亚胺酯；所述添加荧光纳米颗粒时，荧光纳米颗粒与检测抗体的偶联反应通过共价修饰、生物素修饰、螯合作用、空间包裹、疏水作用以及静电吸附作用中的一种进行；所述添加酶标记时，酶标记通过功能修饰团偶联检测抗体，所述功能修饰团包括氨基、羧基、对甲苯磺酰基、巯基、链霉亲和素、生物素或琥珀酰亚胺酯。

4.如权利要求2所述的单分子检测方法，其特征在于，所述检测抗体为多克隆抗体或单克隆抗体；来源包括小鼠源、大鼠源、兔源、羊源、驴源；所述检测探针为单链寡核苷酸，所述检测探针的长度范围为20～100nt。

5.如权利要求1所述的单分子检测方法，其特征在于，步骤s1所述的待测样本为已处理或未处理状态，包括人、植物、动物、实验合成物、环境中的样本；所述待测样本的体积范围为1～500μl。

6.如权利要求1所述的单分子检测方法，其特征在于，步骤s1所述目标物质包括目标核酸及目标蛋白；所述目标蛋白包括蛋白质、激素、细胞因子、...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐德华，曹治家，刘碧蓉，
申请(专利权)人：广州合一生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：