猪腹膜间皮细胞永生化细胞系的构建方法及其应用技术

本发明专利技术提出一种猪腹膜间皮细胞永生化细胞系的构建方法及其应用，包括以下步骤：S10、提供转染体系；S20、提供包装细胞，将所述转染体系和所述包装细胞混合、进行慢病毒包装，得慢病毒颗粒；S30、提供分离的原代猪腹膜间皮细胞，将所述慢病毒颗粒与所述猪腹膜间细胞进行转导，筛选得猪腹膜间皮细胞永生化细胞系，该构建方法制备得到的猪腹膜间皮细胞永生化细胞系可以保持猪腹膜间皮细胞的特性，与猪腹膜间皮细胞特性蛋白表达一致，并且该细胞系能稳定传代至多代，解决原代细胞传代次数限制的局限性，为体外研究试验提供了有效工具。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术细胞工程，特别涉及一种猪腹膜间皮细胞永生化细胞系的构建方法及其应用。

技术介绍

1、腹膜是一种膜状组织，表面光滑且质地较薄，呈现半透明状，位于腹腔与腹部肌肉层之间，能释放液体对腹腔起到湿润作用从而达到对腹部脏器的保护。

2、腹膜间皮细胞(peritoneal mesothelial cells,pmc)在腹腔的生物功能中起着核心功能，其作用不局限于对脏器的保护与润滑，其表面具有一层微绒毛，表面带负电荷，能防止带负电荷的细菌黏附。同时pmc具有与血管内皮相同的中胚层来源，两者都能表达特定的表面标记，使它们能够促进中性粒细胞的的边缘化与迁移；与细胞外基质蛋白相互作用；呈递抗原给免疫细胞；分泌促炎性因子、生长因子、一氧化氮、组织纤溶酶原激活物和纤溶酶原激活物抑制剂等生物学上的重要分子。有研究表明，pmc在腹膜炎与腹膜纤维化的过程中发挥着重要作用。

3、猪腹膜炎由致病细菌，如大肠杆菌、化脓杆菌、葡萄球菌等的感染所引起，也可以继发于寄生幼虫的侵袭及胃肠炎、子宫炎、猪瘟、猪肺疫、猪副伤寒、寄生中病、子宫炎和猪痘，副伤寒等传染病。例如副本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种猪腹膜间皮细胞永生化细胞系的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.如权利要求1所述的猪腹膜间皮细胞永生化细胞系的构建方法，其特征在于，所述转染体系包括过表达质粒和包装质粒。

3.如权利要求2所述的猪腹膜间皮细胞永生化细胞系的构建方法，其特征在于，所述包装质粒包括pMDLg/pRRE、pVSV-G和pRSV-Rev；和/或，

4.如权利要求3所述的猪腹膜间皮细胞永生化细胞系的构建方法，其特征在于，所述包装质粒包括pMDLg/pRRE、pVSV-G和pRSV-Rev，且所述pMDLg/pRRE、所述pVSV-G与所述pRSV-Rev的质量比为5...

【技术特征摘要】

1.一种猪腹膜间皮细胞永生化细胞系的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.如权利要求1所述的猪腹膜间皮细胞永生化细胞系的构建方法，其特征在于，所述转染体系包括过表达质粒和包装质粒。

3.如权利要求2所述的猪腹膜间皮细胞永生化细胞系的构建方法，其特征在于，所述包装质粒包括pmdlg/prre、pvsv-g和prsv-rev；和/或，

4.如权利要求3所述的猪腹膜间皮细胞永生化细胞系的构建方法，其特征...

【专利技术属性】
技术研发人员：李晓敏，陆启荣，刘宇，邱银生，周朗，田俊可，
申请(专利权)人：武汉轻工大学，
类型：发明
国别省市：